关键词:
毛细管电泳
激光诱导荧光检测
响应面优化法
食品分析
姜黄素类化合物
醛类化合物
胍类化合物
摘要:
食品工业的快速发展使得食品的种类、形式以及来源都得到了极大的丰富。社会上对于食品安全与食品质量控制的关注程度越来越高,相关要求与标准也愈发严格,这就意味着建立先进、有效、灵敏、便捷的食品分析方法对监督食品生产、促进食品行业发展具有重大意义。然而由于食品种类繁多、样品基质复杂且在进行质量控制时存在众多影响因素,使得食品分析通常面临很大的挑战。毛细管电泳-激光诱导荧光检测技术(CE-LIF)结合了CE分离效率高、分析速度快、样品消耗量少以及LIF检测具有的高灵敏度、高选择性以及成本相对较低的优点,使其非常适合于复杂样品中痕量物质的分析,有望在食品分析中发挥巨大的作用。二极管激光器具有可选波长丰富、寿命长、价格低、体积小的优点,是LIF检测器的理想光源。实验室以蓝(445 nm)、紫(405 nm)光激光二极管为光源搭建了完整的CE-LIF检测系统,并据此发展了CE-LIF方法用于食品分析:基于姜黄素类化合物的自身荧光建立了超灵敏的微乳电动色谱-激光诱导自身荧光(MEEKC-LINF)分析方法,用于咖喱及摄入咖喱后尿液中姜黄素类化合物的分析;合成7-(二乙氨基)香豆素-3-甲酰肼作为荧光衍生试剂用于醛类化合物的衍生,并发展了胶束电动色谱-激光诱导荧光(MEKC-LIF)分析方法用于酒精饮料中醛类化合物的分析;优化设计烷烃取代胍类化合物的合成路线,为CE分析提供新的添加剂选择,以期拓展CE-LIF在食品分析中的应用。全文共分为四章:第一章:简要介绍了CE-LIF分析技术以及食品分析的研究方法及意义,包括CE-LIF仪器的基本构造、优点、应用以及食品分析的意义和常用方法,并针对近年来CE-LIF分析技术在食品中对非蛋白质氨基酸、蛋白质、核酸、添加剂以及天然产物等方面的分析应用进行了较为系统的总结。第二章:基于实验室搭建的445 nm CE-LIF系统,建立了酸性环境下运行的MEEKC方法用于姜黄素类化合物的超灵敏分析。酸性环境抑制了姜黄素类化合物的解离而使其荧光增强,但同时增加了分离难度。本研究采用响应面优化法作为多参数实验设计的工具,优化了微乳组成以获得较高的灵敏度和分离效率。凭借匹配的激发波长、酸性环境和微乳的增敏作用,所建立的MEEKC-LINF方法灵敏度可达到pg/m L的水平。结合简单的SPE方法,所建立的MEEKC-LINF方法被成功应用于调料咖喱粉中的姜黄素类化合物以及摄入咖喱粉后人尿液中食源性姜黄素类化合物的测定及其代谢产物的分析,并绘制了1-12小时内姜黄素类化合物的尿代谢趋势曲线。该方法具有良好的灵敏度和选择性,在姜黄素类化合物的药效学和药代动力学研究中具有广阔的应用前景。第三章:合成7-(二乙氨基)香豆素-3-甲酰肼(CHH)作为荧光衍生试剂用于醛类化合物的衍生,结合实验室搭建的405 nm CE-LIF分析系统,利用响应面优化法对衍生过程的时间、温度以及催化剂醋酸的用量进行了系统考察。以330μM的醋酸为催化剂,在45 C下,反应120分钟即可对所选醛类进行高效衍生。在此基础上,发展了MEKC-LIF方法分析醛类化合物的衍生产物,13种选定的醛类化合物可在30分钟内实现分离,检测限在0.21-4.72 n M之间。本工作发展的荧光衍生策略简单高效、条件温和,结合MEKC-LIF分析高灵敏度的特点,已成功应用于市售四种不同酒精饮料中醛类化合物的分析。第四章:在总结烷烃胍类化合物合成经验的基础上,优化了1,1-二甲基-3,3-二乙基胍以及1,1,3,3-四乙基胍的合成方法,在此基础上合成了未见报道的1,1-二甲基-3,3-二丙基胍,为烷烃胍类化合物的合成提出了一条简洁高效的路径,并具备对烷烃胍的碳链进一步延长的潜力。目前我们正在尝试合成具有更长烷基链的胍类化合物,并将制备的烷烃胍类化合物作为背景电解质或缓冲添加剂应用于CE分析中,以期增强CE的分析能力,拓展其应用范围。