关键词:
有机小分子荧光探针
活性氧
活性硫
生物成像
环境监测
食品检测
摘要:
许多研究表明,细胞内氧化还原状态的维持涉及多条信号传导通路,包括活性氧(Reactive oxygen species,ROS)和活性硫(Reactive sulfur species,RSS)的积极参与。它们之间的交叉反应在生理和病理过程中起着非常重要的作用。但由于ROS和RSS具有寿命短、反应活性高、瞬间转化等特点,开发能够原位监测生物系统中的ROS和RSS产生、分布、积累和动态波动的高效分析工具就尤为重要。近年来,荧光探针作为一种强大的检测工具,因其响应速度快、特异性好、分辨率高、组织穿透性强而备受关注。得益于这些优点,荧光探针成功应用于环境检测、体内成像、药物释放、生物传感等领域。因此,本论文中设计合成了三种基于不同反应机理的荧光探针用于检测ROS和RSS,并探究其优异的光物理性质及实际应用。本文主要研究内容如下:1)基于吩噻嗪-呫吨结构的荧光探针用于检测活细胞和环境水样中的HClO次氯酸(HClO)是一种重要的生物活性分子。偏离正常水平的HClO会影响机体的免疫系统和生理病理过程,从而导致许多疾病的发生。因此,发展一种快速灵敏的HClO检测方法是非常重要和必要的。在本项工作中提出了一种新型吩噻嗪-呫吨结构荧光团,该荧光团具有突出的HClO响应性和优异的可塑性。利用吩噻嗪-呫吨荧光团,设计合成了一种用于HClO痕量分析的“开启”型化学传感器PTZ-CHO。在HClO存在下,吩噻嗪上的硫原子被迅速氧化成亚砜,荧光显著增强(约100倍)。值得注意的是,PTZ-CHO中携带一个裸露的醛基,可进一步引入其他识别基团设计多功能探针;或扩大共轭结构,使探针的光谱红移。此外,PTZ-CHO还具有响应快、灵敏度高、特异性强、光稳定性好等优点。基于以上优点,这种独特的HClO响应传感器已成功应用于细胞和复杂环境水样中HClO的检测。2)可视化区分生物硫醇的多位点荧光探针用于牛血清样本中谷胱甘肽的检测生物硫醇主要包括半胱氨酸(Cysteine,Cys)、同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)和谷胱甘肽(Glutathione,GSH),它们在人体生理过程中起着重要作用。异常水平的生物硫醇可能会导致一系列的疾病,如肝脏损害、老年痴呆、癌症等。由于这三种生物硫醇在化学结构和反应性方面非常相似,因此使用单分子荧光探针来区分它们仍是一个巨大的挑战。该项工作中提出了一种基于吗啉环香豆素的具有两个潜在结合位点的近红外荧光探针,利用Cys、Hcy和GSH空间结构的差异,在不同的结合机制下产生不同的反应产物,导致体系的颜色和荧光信号发生不同的变化。值得注意的是,该探针可以利用肉眼可视化同时区分Cys、Hcy和GSH。此外,探针已成功的应用于牛血清中GSH的检测。3)结构改性的新型异佛尔酮荧光探针用于检测水环境和食品样品中的H2S硫化氢(H2S)对维持生物体的正常运转和稳定具有突出贡献,同时也存在于环境水样和变质的食品中。因此,发展一种高灵敏检测技术用于示踪H2S是很有前景和意义的。受此启发,该项工作通过引入溴原子设计并合成了一种新型的荧光探针SP-Br用于H2S的检测。SP-Br相较已报道的基于同一荧光母体的H2S探针,具有更长的荧光发射(λem=670 nm),更短的响应时间(3 min),更低的检测限(149 n M)和更宽的检测范围(0-30 n M)。SP-Br可以发射出微弱的黄色荧光,在H2S的存在下,670 nm处的发射强度有明显增强。此外,SP-Br已成功应用于实际水样和啤酒等样品的监测中,在环境污染和食品质量分析等领域具有一定的发展前景和价值。