关键词:
化学发光
智能手机
多粘菌素B
抗菌肽
细菌检测
摘要:
食源性疾病是全球公共卫生安全的重要威胁,不仅严重危害人类身体健康并会造成巨大的社会经济负担,快速、便携的食源性致病菌检测方法对食源性疾病和环境污染的预警和防控具有重要意义。目前,常用的致病性细菌检测方法有平板菌落计数法、聚合酶链式反应(PCR)、免疫学检测以及生物传感器等。虽然这些方法有着较高的准确度和灵敏度,但其需要大型精密仪器、专业的技术人员以及复杂的样品处理过程难以实现致病性细菌的快速现场检测。而智能手机作为高普及率的移动设备,将其与可视化传感器进行结合,所形成的基于智能手机的可视化传感检测技术具有低成本、经济高效、无需大型仪器以及快速分析检测等优势,足以实现现场即时检测的目标。基于此,本论文设计开发了一种基于Android智能手机的可视化分析检测软件,构建了一种基于H2O2刺激响应型化学发光传感检测系统,应用所设计的分析软件和化学发光传感检测体系构建了一种基于可视化分析软件的智能手机细菌化学发光传感检测系统,成功实现对革兰氏阴性菌的快速、灵敏的检测分析。具体的研究结果如下:
1.基于智能手机可视化分析软件的设计与开发。本工作鉴于细菌浓度与灰度值存在良好的线性关系,该软件基于Android Studio开发平台,结合OpenCV(开源计算机视觉与机器学习软件库)、commons-math3(科学计算类库)、SQLite(数据库)等,采用模块化设计的思想,成功实现了细菌浓度与灰度关系的线性拟合以及对线性曲线的添加、删除、修改和查询功能,并应用该线性曲线对实际样本革兰氏阴性大肠杆菌进行识别与定量检测。
2.H2O2刺激响应型化学发光纳米探针的合成、表征及检测。本工作中我们合成了两种靶向性探针:一是合成了由多粘菌素B(PMB)修饰的化学发光纳米微球探针(CL@PS@PMB),使得化学发光纳米微球探针能够选择性捕获革兰氏阴性菌并产生化学发光信号,作为发光元件;二是合成了由抗菌肽(AMP)修饰的纳米微球探针(PCN-224@AMP),使得该纳米微球探针能被修饰到细菌表面,光照之后,可以产生大量的单线态氧(1O2),作为单线态氧(1O2)生成元件。当革兰氏阴性菌例如大肠杆菌存在时,两种探针都结合到大肠杆菌的表面,原本两种游离间隔较远的探针被拉近,从而经光照之后PCN-224型MOF颗粒产生的单线态氧(1O2)可以快速扩散到化学发光纳米探针使其活化,然后加入触发剂例如过氧化氢,可以产生较强的化学发光信号,从而实现对革兰氏阴性菌的检测。
3.基于可视化分析软件的智能手机细菌化学发光传感检测系统的建立与应用。通过对智能手机可视化分析软件的设计以及化学发光传感检测体系的构建,将二者进行集成,便形成了基于可视化分析软件的智能手机化学发光传感检测系统,智能手机通过对化学发光检测系统产生的发光信号进行检测、转换与量化,从而实现对革兰氏阴性菌的浓度的估计。以检测大肠杆菌为例,当大肠杆菌的浓度在10-105 CFU/mL范围内时,经转换后的化学发光灰度值和大肠杆菌的浓度之间存在较好的线性关系,其线性方程为y=22.4x+145.4,线性相关系数为0.9746,检出限为2 CFU/mL。因此,该系统的实现有望为细菌检测提供一种简单、快速、低成本的现场检测方法。