关键词:
运动性疲劳
补中益气汤
PINK1
骨骼肌线粒体稳态
骨骼肌
摘要:
目的:探究补中益气汤对运动性疲劳的影响及其发挥疗效的潜在机制。方法:60只雄性SPF级C57BL/6J小鼠随机分为空白组、模型组、补中益气汤低、中、高剂量组及维生素C组。补中益气汤低、中、高剂量组分别按4.1g/8.2g/16.4g·kg-1浓度给药;维生素C组按0.04g·kg-1浓度给药;空白组和模型组予生理盐水;各组每日灌胃0.2ml,每日1次。除空白组外,其余组小鼠进行为期6周的负重力竭游泳实验。实验结束取血,留取胸腺、肝、脾、肾等脏器称重。试剂盒检测小鼠血清乳酸(LD)、血尿素氮(BUN)、肌酸激酶(CK)、丙二醛(MDA)等指标以评估疲劳程度;苏木素-伊红(HE)染色观察骨骼肌病理形态;电镜下观察骨骼肌细胞超微结构重点观察线粒体形态变化;试剂盒检测骨骼肌腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)含量及骨骼肌线粒体呼吸链复合体I、Ⅱ、V的活性;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-timePCR)及蛋白免疫印迹法 (WB)检测PTEN诱导的假定蛋白激酶1(PINK1)介导的骨骼肌线粒体稳态通路关键基因及蛋白的表达。结果:与空白组比较,模型组小鼠体重增长率显著下降(P<0.01);胸腺指数显著降低(P<0.01);血清LD、BUN、MDA含量及CK活性提高(P<0.01);HE染色可见骨骼肌排列紊乱、肌纤维断裂,肌纤维间隙可见较多的炎症细胞浸润;电镜下可见骨骼肌细胞内线粒体形态改变(空泡状线粒体增多,嵴消失),线粒体数量减少;骨骼肌ATP含量及骨骼肌线粒体呼吸链复合体I、Ⅱ、V的活性降低(P<0.05);PINK1、E3泛素连接酶(Parkin)、与YRPW基序相关的分裂毛状/增强子(HEY1)、动力相关蛋白1(Drp1)、螯合体1(p62)蛋白及缺氧诱导因子1亚基α(HIF-1α)基因表达水平升高(P<0.05),微管相关蛋白1轻链3β(LC3B)蛋白表达水平降低(P<0.01)。与模型组比较,补中益气汤各组游泳力竭时间显著延长(P<0.01);体重增长率显著提高(P<0.01);胸腺指数显著增加(P<0.01);血清LD、BUN、MDA含量及CK活性降低(P<0.05,P<0.01);HE染色可见骨骼肌排列整齐,炎症细胞减少;透射电镜下骨骼肌线粒体形态完整,嵴密集,线粒体数量增多;骨骼肌ATP含量及骨骼肌线粒体呼吸链复合体I、Ⅱ、V的活性提高(P<0.05,P<0.01);骨骼肌组织中PINK1、Parkin、HEY1、LC3B、Drp1蛋白及HIF-1α基因表达水平升高(P<0.05,P<0.01),p62水平降低(P<0.05,P<0.01)。结论:补中益气汤能够有效防治运动性疲劳,并可能通过以PINK1为中心的HIF-1α/PINK1/Parkin与HIF-1α/HEY1/PINK1信号通路调控骨骼肌线粒体稳态发挥作用。