关键词:
胃癌
外泌体
Kupffer细胞
M2样极化
肝转移前生态位
摘要:
目的探讨胃癌细胞来源的外泌体与肝Kupffer细胞间的相互作用对胃癌肝转移的影响,并揭示其潜在的作用机制。方法通过裸鼠模型、病毒转染和流式分选技术,从胃癌细胞株(MKN45)中构建具有高度肝转移潜能的细胞株(MKN45-HL)。超速离心法收集外泌体,并通过纳米流式仪、透射电镜以及Western blot等进行表征和鉴定。构建胃癌细胞外泌体训导的裸鼠肝转移模型,并经活体成像技术监测肝转移灶的发展。通过细胞培养、qRT-PCR和免疫荧光染色等分析胃癌细胞外泌体对巨噬细胞极化的作用。利用外泌体miRNA的组学分析和qRT-PCR筛选验证胃癌外泌体促巨噬细胞M2极化的miRNA分子靶点。结果胃癌来源的外泌体主要集中在肝脏,大多数被肝内巨噬细胞所摄取,且在体外培养和裸鼠体内都能促进巨噬细胞向M2型极化。MKN45与MKN45-HL外泌体训导的裸鼠经脾脏注射小鼠前胃癌细胞后均出现明显的肝转移灶,且MKN45-HL外泌体表现出更强的促肝脏巨噬细胞M2极化和促胃癌细胞肝转移的能力。两者的miRNA组学分析显示了很多差异性表达的miRNAs。高肝转移潜力的胃癌细胞系和肝转移患者血清外泌体中miR-519a-3p显著升高,可经外泌体被巨噬细胞内化,对胃癌肝转移有预测价值,并与肝转移预后密切相关。结论胃癌细胞来源的外泌体经miR-519a-3p触发肝Kupffer细胞的M2样极化,推进胃癌的肝转移进程,可能是塑造胃癌肝转移前生态位微环境的重要分子。本研究为揭示胃癌肝转移机制提供了新视角,并为未来的治疗策略提供了潜在靶点。