关键词:
名医经验
慢性难愈性创面
网络药理学
分子对接
JAK2-STAT3
巨噬细胞极化
摘要:
目的:基于网络药理学、分子对接及细胞实验探究黄枫教授经验方益气活血方(YQHXF)介导巨噬细胞极化治疗慢性难愈性创面(CRW)的作用机制。方法:结合网络药理学和分子对接技术,分析并验证YQHXF影响CRW潜在靶点。CCK8检测YQHXF和LPS对Raw264.7巨噬细胞和增殖活性的影响,利用LPS建立RAW264.7细胞炎症模型,并加入JAK2信号通路激活剂香豆霉素a1(C-a1)和YQHXF含药血清干预,分组如下:Raw264.7组(对照组)、Raw264.7+LPS组(模型组)、Raw264.7+LPS+YQHXF组、Raw264.7+LPS+YQHXF+C-a1组、Raw264.7+LPS+C-a1组,流式细胞术检测Raw264.7细胞极化情况;RT-qPCR和ELISA检测炎症因子IL-4、IL-6、IL-13、TNF-α的转录及表达,Western Blot检测JAK2/STAT3通路磷酸化情况。结果:网络药理学与分子对接研究发现,YQHXF可能通过介导JAK2/STAT3信号通路调控巨噬细胞极化,调节炎症因子表达,促进CRW的愈合。细胞实验结果表明,YQHXF可显著提高巨噬细胞增殖活性(P<0.05);模型组和C-a1组JAK2和STAT3磷酸化、M1型巨噬细胞比例、IL-6和TNF-α转录和蛋白表达明显高于对照组(P<0.05);与模型组和C-a1组比较,加入YQHXF处理可显著降低JAK2和STAT3磷酸化、M1型巨噬细胞比例、IL-6和TNF-α转录和蛋白表达水平(P<0.05),提高M2型巨噬细胞比例、IL-4、IL-13转录和蛋白表达水平(P<0.05)。结论:YQHXF可能通过增强巨噬细胞增殖活性,抑制JAK2、STAT3磷酸化,正向调控巨噬细胞M2抗炎表型极化,抑制M1促炎表型极化,减轻炎症反应,达到对CRW的治疗效果。