关键词:
益脾养肝方
肝癌前病变
肝细胞恶变
慢性炎症
M1型巨噬细胞
大鼠
摘要:
目的基于M1型巨噬细胞极化-慢性炎症-肝细胞恶变发展过程探究益脾养肝方治疗肝癌前病变大鼠的作用机制。方法90只Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、护肝片组和益脾养肝方高、中、低剂量组,每组15只。空白组予蒸馏水腹腔注射,其余各组予二乙基亚硝胺腹腔注射诱导肝癌前病变模型,每周2次(50 mg/kg),连续16周。造模第2日起,益脾养肝方高、中、低剂量组分别予1.2、0.6、0.3 g/mL益脾养肝方灌胃,护肝片组予护肝片溶液921 mg/kg灌胃,空白组和模型组予等量生理盐水灌胃,连续16周。观察肝脏外观,ELISA检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、α-L-岩藻糖苷酶(AFU)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)含量,HE染色、Masson染色观察肝组织形态,免疫组化检测肝细胞恶变标志物OV6、细胞角蛋白19(CK19)、CD133和上皮细胞黏附分子(EpCAM)表达,qPCR检测肝组织CK19、CD133、EpCAM mRNA表达,免疫荧光共定位检测M1型巨噬细胞标志物CD68与IL-6和TNF-α共表达。结果与空白组比较,模型组大鼠肝脏质硬,表面粗糙、边缘变钝,可见大量结节,血清ALT、AST、ALP、AFU、TNF-α、IL-6、i NOS、MCP-1含量明显升高(P<0.01),肝组织有大面积异型增生结节、炎性细胞浸润,胶原纤维增多,肝组织OV6、CK19、CD133、EpCAM表达显著升高,CD68与IL-6和TNF-α共表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,各给药组大鼠肝脏结节减少且较小,血清ALT、AST、ALP、AFU、TNF-α、IL-6、iNOS、MCP-1含量均显著降低(P<0.01),肝细胞异型增生及炎性细胞浸润显著改善,胶原纤维减少,肝组织OV6、CK19、CD133、EpCAM表达显著降低,CD68与IL-6和TNF-α共表达显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论益脾养肝方可能通过抑制M1型巨噬细胞极化减轻炎症反应,改善肝细胞恶变,对二乙基亚硝胺诱导的肝癌前病变大鼠发挥治疗作用。