关键词:
卵巢低反应
针刺
秩边透水道
卵巢功能
PI3K/AKT/FOXO3a信号通路
细胞凋亡
摘要:
目的:基于磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/叉头蛋白O3a(FOXO3a)通路观察“秩边透水道”针刺对卵巢低反应(POR)小鼠卵巢功能的保护作用,探析针刺抑制POR卵巢颗粒细胞凋亡的可能机制。方法:将动情周期规律的45只小鼠随机分成空白组、模型组和针刺组,每组15只。模型组和针刺组小鼠予雷公藤多苷混悬液(50 mg·kg^(-1)·d^(-1))灌胃2周制备POR模型。造模成功后针刺组小鼠予“秩边透水道”针刺干预连续2周,每日1次,每次20 min。干预结束次日开始促排卵,各组促排卵后完成取材。采用阴道脱落细胞涂片观察小鼠动情周期变化,记录小鼠取卵数、卵巢湿重、末次体质量与卵巢指数;ELISA法检测小鼠血清抗缪勒管激素(AMH)、卵泡刺激素(FSH)、雌二醇(E2)、黄体生成素(LH)含量;HE染色法观察小鼠卵巢组织形态;TUNEL染色法观察小鼠卵巢颗粒细胞凋亡情况;实时荧光定量PCR法检测小鼠卵巢组织PI3K、AKT、FOXO3a mRNA表达;Western blot法检测卵巢组织B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)关联X的蛋白(BAX),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)和磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组小鼠动情周期紊乱率升高(P<0.01);与模型组比较,针刺组小鼠动情周期紊乱率降低(P<0.01)。与空白组比较,模型组小鼠取卵数、卵巢湿重、卵巢指数和末次体质量降低(P<0.01);与模型组比较,针刺组小鼠取卵数、卵巢指数和卵巢湿重升高(P<0.01,P<0.05),末次体质量比较差异无统计学意义(P>0.05)。与空白组比较,模型组小鼠血清FSH、LH含量升高(P<0.01),血清AMH、E2含量降低(P<0.01);与模型组比较,针刺组小鼠血清FSH、LH含量降低(P<0.01,P<0.05),血清AMH、E2含量升高(P<0.01,P<0.05)。与空白组比较,模型组小鼠卵巢组织各级正常发育卵泡数量减少且形态较差,各级闭锁卵泡增多;与模型组比较,针刺组小鼠卵泡数量、形态和颗粒细胞结构有不同程度改善,各级闭锁卵泡减少。与空白组比较,模型组小鼠卵巢颗粒细胞凋亡率升高(P<0.01);与模型组比较,针刺组小鼠卵巢颗粒细胞凋亡率降低(P<0.01)。与空白组比较,模型组小鼠卵巢组织FOXO3a mRNA及Caspase-3、BAX蛋白表达升高(P<0.01),卵巢组织PI3K、AKT mRNA及p-PI3K、p-AKT和p-FOXO3a蛋白表达降低(P<0.01);与模型组比较,针刺组小鼠卵巢组织FOXO3am RNA及Caspase-3、BAX蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),卵巢组织PI3K、AKT mRNA及p-PI3K、p-AKT、p-FOXO3a蛋白表达升高(P<0.01,P<0.05)。结论:“秩边透水道”针刺可以抑制POR小鼠卵巢颗粒细胞凋亡,改善卵巢功能,其机制可能与调节PI3K/AKT/FOXO3a通路中的关键因子有关。