课程文献中心 更多>>

关键词： 猪流行性腹泻病毒   猪流行性腹泻   基因组   诊断  

摘要： 猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）引起的猪流行性腹泻（Porcine epidemic diarrhea,PED），是一种急性、高度接触性、高发病率和高致死率的猪肠道传染病，给全球养猪业造成了巨大的经济损失。深入了解PEDV的基因组结构和功能是研制高效安全疫苗的关键。通过解析PEDV的基因组结构、编码的蛋白质以及其与宿主细胞的相互作用，研究人员可以设计出更具针对性的疫苗候选物。诊断技术的进步对于PED的早期诊断及免疫后应答水平监测和评估至关重要。因此，综述了PEDV的基因组结构与功能（包括S、E、M、N、辅助蛋白和非结构蛋白）、血清学以及分子诊断方法[如酶联免疫吸附试验（ELISA）、聚合酶链式反应（PCR）、环介导等温扩增（LAMP）、病毒中和（VN）和间接免疫荧光测定（IFA）、免疫层析试验（ICA）、荧光微球免疫测定（FMIA）、序列测定和聚类规则间隔短回文重复序列（CRISPR）-CRISPR相关蛋白（Cas）]的最新进展，旨在为建立快速有效的PEDV检测方法提供思路，并为临床上有效防控PED提供参考。

关键词： 鸭3型甲肝病毒   分离鉴定   VP1基因  

摘要： 【目的】确定引起安徽某鸭场雏鸭肝脏出血和大量死亡的病原及其遗传进化特征。【方法】对安徽省某鸭场的病死雏鸭中采集的出血肝脏开展鸭已知病原核酸检测、病原分离鉴定和动物回归试验，在明确其病原为鸭3型甲肝病毒（Duck hepatitis A virus type 3, DHAV-3）的基础上分析其VP1基因序列分子特征。【结果】细菌分离结果显示，未分离到细菌；经病毒核酸（RT-）PCR检测结果显示，鸭3型甲肝病毒（DHAV-3）核酸阳性，未检测出其他已知引起鸭肝出血的病毒核酸。将该阳性样品经鸭胚进行病毒分离与传代，发现接种后鸭胚发生死亡，胚体全身出血，对第5代尿囊液经RT-PCR检测为DHAV-3，将其命名为AH230225。经测定，该分离株的鸭胚半数致死量(Effective lethal dose 50, ELD50)为10-4.17/0.1 mL。动物回归试验表明，该毒株对樱桃谷雏鸭的致死率为80%，且攻毒死亡鸭肝脏和肾脏的剖检病变与临床典型病变相近。对该分离毒的VP1基因核苷酸序列进行同源性分析，显示AH230225株的VP1基因核苷酸序列与AH07株DHAV-3（安徽分离株）的同源性最高，为98.8%，与GenBank登录的10株DHAV-3分离株VP1基因核苷酸序列同源性为90.4%～98.8%，而与DHAV-1和DHAV-2的VP1基因核苷酸序列同源性分别为62.1%～63.0%、64.6%～64.9%；基于VP1蛋白氨基酸序列的遗传进化显示，该分离株与AH07株DHAV-3处于同一小进化分支上，亲缘关系最近；而与SD01株、G株和韩国株（AP-04009、AP-03337）等亲缘关系较远，即远离DHAV-1和DHAV-2进化分支。【结论】引起安徽某鸭场雏鸭肝脏出血和大量死亡的病原为鸭3型甲肝病毒DHAV-3，同时明确了该毒株VP1基因的分子特征及遗传进化规律，为深入研究DHAV-3的致病机制和制定防控措施提供科学依据。

关键词： 侧脑室   横窦   腺相关病毒   脑发育  

摘要： 目的 选择侧脑室注射（LVI）与横窦注射（TSI）病毒的方法，比较不同途径介导的腺相关病毒感染新生小鼠脑组织的范围与脑区差异，为研究小鼠发育期特定脑区功能选择病毒注射方法提供参考。方法 对新生一天的C57BL/6仔鼠分别使用两种方法进行rAAV-GAD67-EGFP-WPREs病毒注射，并在第24日收集脑组织样品，制备冰冻切片观察病毒携带的荧光蛋白在小鼠脑内的感染表达范围。结果 LVI方法操作简单，但病毒表达的脑区范围较小，主要集中在大脑皮层。TSI方法操作步骤较复杂，病毒用量更大，但病毒感染的脑区范围更广。结论 不同注射方法会介导工具病毒在不同的脑区范围表达，其中LVI的方法更适合大脑皮层的相关发育研究，TSI的方法适合几乎全部脑区的发育研究。

关键词： SARS-CoV-2   S基因   变异特征   替换速率   选择压力  

摘要： 目的:分析新冠病毒感染和疫苗接种在病毒变异中的影响。方法:选取了江苏省2023年2 659份本土新型冠状病毒标本的全基因组测序序列进行了分析，并收集人口学和临床特征等相关信息，利用单因素和多因素线性回归模型分析探讨感染及疫苗接种对病毒全基因组变异速率和S基因选择压力的影响。结果:这些感染者的平均年龄为55.0(31.0, 74.0)岁，60岁及以上年龄组1 150例(43.2%)，男性1 367例(51.4%)，有新冠疫苗接种史者2 044例(76.9%)，初次感染新冠者1 629例(61.3%);感染者临床症状以轻型为主，共2 434例(91.5%)，重型及以上症状者29例(1.1%)。SARS-CoV-2全基因组的平均替换速率为9.69(9.38, 9.98)×10 －4subs/site/year，S基因的dN/dS值为6.08(5.56, 8.66)，显著大于1( P<0.001)，表明受到了正选择作用。单因素和多因素线性回归模型分析结果显示，具有疫苗接种史且再次感染、年龄20~30岁、60岁及以上者的SARS-CoV-2替换速率更高，男性、临床症状为中型、重型及以上者的SARS-CoV-2替换速率更低;具有疫苗接种史且再次感染、50~60岁、60岁及以上者的S基因dN/dS更小。 结论:在新冠疫苗接种及感染施加的免疫压力下，新冠病毒全基因组变异加快，但S基因的非同义突变率减弱，引起这些现象的机制需进一步深入研究。

关键词： 流感病毒H3N2   LiCl   A549细胞  

摘要： 目标:分析氯化锂(Lithium chloride，LiCl)在人非小细胞肺癌细胞(A549)抗甲型H3N2流感病毒(Influenza A virus (H3N2))活性研究。方法:不同浓度LiCl作用于A549细胞，24 h后观察细胞病变(cytopathic effect，CPE)，CCK-8方法测定其对细胞活性的影响;H3N2 (MOI＝1)感染A549细胞后，加入不同浓度的LiCl作用24 h，观察CPE、RT-qPCR方法测定病毒载量，测定病毒滴度;不同浓度LiCl提前和A549在37 ℃，5%CO 2孵育2 h，加入病毒感染24 h，RT-qPCR方法测定病毒载量;LiCl、H3N2和A549 4 ℃孵育1 h，35 ℃，5%CO 2培养24 h，RT-qPCR方法测定病毒载量;H3N2和A549 4 ℃孵育1 h，然后加入不同浓度LiCl，35 ℃，5%CO 2培养24 h，RT-qPCR方法测定病毒载量;H3N2感染A549细胞后，加入不同浓度的LiCl作用24 h，分别检测上清和细胞的病毒RNA载量和病毒滴度，然后计算上清和细胞相应的比值H3N2(MOI＝10)和BV(MOI＝1)感染A549细胞后，加入不同浓度的LiCl作用24 h, RT-qPCR方法测定病毒载量。 结果:LiCl浓度<50 mmol/L时，A549的细胞活性>90%;不同浓度的LiCl均可显著降低H3N2病毒载量( P<0.000 1)，LiCl处理组的CPE较病毒对照组有所缓解，并且呈剂量依赖性;LiCl不通过影响细胞本身抑制病毒复制;不同浓度LiCl显著抑制H3N2进入A549( P<0.000 1)也对吸附A549细胞有一定程度的抑制作用( P<0.01);LiCl不影响H3N2的组装和释放( P>0.05);最后也发现LiCl对多种流感病毒毒株有广谱的抗病毒效果( P<0.000 1)。 结论:LiCl可能通过抑制H3N2吸附和进入A549细胞以及H3N2在A549细胞中复制来发挥抗病毒作用，为LiCl防治病毒感染提供了数据参考。

关键词： 间充质干细胞   干细胞疗法   炎症性肠病   溃疡性结肠炎   克罗恩病   机制   工程化干细胞  

摘要： 背景：炎症性肠病发病率逐渐升高，且暂无良好的治疗方案，研究表明与传统治疗方法相比，间充质干细胞治疗炎症性肠病展现出较佳的疗效。目的：综述不同来源间充质干细胞治疗炎症性肠病的作用机制，为后续研究提供思路。方法：以“间充质干细胞，外泌体，炎症性肠病，溃疡性结肠炎，克罗恩病”和“mesenchymal stem cells,MSCs,exosomes,extracellular vesicles,EVs,inflammatory bowel disease,IBD,ulcerativecolitis,UC,Crohn’s disease,CD”分别作为中、英文关键词，在中国知网、PubMed数据库进行检索，最终纳入符合标准的89篇文献进行综述。结果与结论：目前用于治疗炎症性肠病的间充质干细胞共有6类，分别为骨髓间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、围产期组织来源间充质干细胞、诱导多能干细胞衍生的间充质干细胞、胚胎干细胞衍生的间充质干细胞、牙龈间充质干细胞。移植方式共有5种，静脉注射和腹腔注射为最常用方式，此外还有局部注射、肠系膜注射、灌肠3种方式。上述间充质干细胞减轻炎症性肠病症状或延缓其进展的主要机制包括分化、再生、抗炎、免疫调节、神经保护、抗氧化应激、归巢、调节肠道菌群、自噬、铁死亡、内质网应激等。不同来源间充质干细胞在功能上有一定相似性，但又具有不同特点，这些特点使它们具有独特优势和治疗潜力。然而，目前对不同来源间充质干细胞特性的研究仍然有限，需要对不同来源间充质干细胞之间的细微差别进行更深入研究，以优化其治疗炎症性肠病的潜力，同时，临床使用安全性也有待进一步观察。

关键词： H9N2   禽流感   系统进化   分子特征  

摘要： 目的:分析2013—2022年安徽省人感染的H9N2亚型禽流感病毒与外环境毒株的遗传进化特点及分子特征，为人感染禽流感防控提供了监测经验。方法:选取安徽省流感监测网络实验室中的外环境样本和人源样本，通过鸡胚分离得到63株病毒，采用RT-PCR法扩增后进行全基因组测序，对其生物信息进行分析，构建基因进化树并分析其遗传进化特征以及潜在糖基化位点。结果:血凝素(HA)基因属于9.***.4.5支系，蛋白裂解位点绝大部分为"PSRSSR\GL"，神经氨酸酶(NA)、碱性蛋白1(PB1)、酸性蛋白(PA)、非结构蛋白(NS)和核蛋白(NP)基因属于F/98支系，基质蛋白(MP)基因属于G1/97支系，碱性蛋白2(PB2)基因属于ST/7488支系。HA蛋白发生了T155N、R164Q、H183N、T189D/V、A190V/T和Q226L突变，NA蛋白发生了62~64位点缺失，PB2蛋白发生了T271A、I292V/M和E627V/L突变，PA蛋白发生了K356R和S409N突变。63株分离株存在6个潜在糖基化位点。结论:2013—2022年安徽省外环境和人源采集的H9N2亚型禽流感病毒属于同一进化分支，氨基酸位点突变提示了病毒呈现出一种逐渐适应哺乳动物宿主环境的趋势，因而需进一步研究病毒的适应性进化情况以及开展相关的监测工作。

关键词： 生态系统服务   生境破碎化   广义可加模型   地理探测器   湖北省  

摘要： [目的]以湖北省为研究区域,探讨生态系统服务和生境破碎化之间的关系。[方法]利用2005和2020年的土地利用数据,计算生境面积比(M)、生境间欧氏最近邻距离的平均值(N)和生境边缘长度(P)等指标,采用InVEST模型评估水源涵养、土壤保持、碳储存和生境质量4种生态系统服务的价值,并通过广义可加模型和地理探测器,分析不同生境破碎化过程对生态系统服务变化的影响及其交互作用。[结果]2005—2020年湖北省生境破碎化程度加剧,各生境类型的M减少、N增加、P增多;湖北省生态系统服务价值呈现先降低后升高的趋势,其中水源涵养和土壤保持主要受气候因素影响,碳储存和生境质量主要受生境破碎化影响;湖北省生境破碎化过程对生态系统服务的影响存在线性或非线性关系,且不同过程之间存在正向的非线性增强作用。[结论]该研究为湖北省生态系统服务的保护和管理提供了科学依据和参考建议。

关键词： H1N1pdm   聚合酶碱性蛋白2   突变  

摘要： 目的:了解广东省甲型H1N1pdm流感病毒聚合酶碱性蛋白2(polymerase basic protein 2，PB2)基因变异株的分子特征，探讨其特异性分子位点，为流感病毒防控提供科学依据。方法:采集感染PB2基因变异株的2例病例咽拭子标本进行病毒分离，并挑选23株广东省流感病毒株进行测序分析，利用GISAID提供的参考序列和疫苗株序列对血凝素(hemagglutinin，HA)和PB2基因进行进化分析;开展毒株抗原分析和神经氨酸酶(neuraminidase，NA)抑制试验;构建PB2蛋白模型，分析聚合酶活性。结果:PB2-D701N和PB2-A271S变异株HA基因出现H399N氨基酸位点突变，均属于6B.1A.5a.2a分支;与疫苗株A/Victoria/4897/2022同属大分支不同小分支，均为疫苗类似株。在三维结构中，PB2-D701N和PB2-A271S突变发生电荷改变和亲疏水变化。结论:PB2-D701和A271高度保守，PB2突变株尚未成为优势株，但其抗原性与疫苗匹配性高，对NA抑制剂敏感。三维模型推测，PB2-D701N突变可增强病毒的致病力而影响传播能力，PB2-A271S则可能影响流感病毒的聚合酶活性和聚合酶复合物的合成。

关键词： 中华穿山甲   种群   分布   数量   勐仑  

摘要： 采用访问调查法、样线调查法和红外相机陷阱拍摄法在西双版纳国家级自然保护区勐仑子保护区对中华穿山甲种群进行调查。结果显示,红外相机捕获的中华穿山甲影像计4个位点,样线调查发现中华穿山甲活动痕迹6处,访问调查法发现中华穿山甲疑似分布位点16个,提取这26个分布位点的高程、植被及生境信息,用ArcMap软件模拟生成勐仑子保护区中华穿山甲潜在分布区,面积约715 hm2,中华穿山甲种群密度为0.006只/hm2,中华穿山甲在调查区域的数量为（4±2）只。建议保护中华穿山甲生境,加强执法宣传力度,防止非法猎杀中华穿山甲,严肃查处中华穿山甲地下交易。