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关键词： mRNA   递送载体   病毒样颗粒   mRNA药物  

摘要： 随着信使核糖核酸(messenger RNA， mRNA)技术的不断发展，mRNA药物在近些年展现出了广阔的应用前景。mRNA自身易被降解且难以直接入胞，因此mRNA递送载体一直是mRNA药物研发的重点之一。尽管脂质纳米颗粒(lipid nanoparticles， LNP)已经广泛应用于mRNA的递送，但LNP倾向于在肝脏聚集，并且重复给药后容易诱发机体炎症反应从而导致组织损伤。相比LNP，病毒样颗粒(virus-like particles， VLP)具有生物相容性高、安全性高的优势，有望为mRNA递送提供新的解决思路。本文从实际应用需求出发，根据VLP实现mRNA递送的几个步骤，即颗粒组装、递送入胞和胞内释放，对该领域的研究进展进行综述，以期为开发新型VLP递送载体提供依据和设计思路，从而推动VLP载体在mRNA递送领域的发展，为mRNA疗法的研究和应用提供新的可能。

关键词： 新型鹅细小病毒   短喙侏儒综合征   防控  

摘要： 新型鹅细小病毒病是由新型鹅细小病毒引起以雏鸭腿软瘫痪、鸭喙变短、舌头外露、生长发育受阻等为主要症状的疫病.2019年该病在临武县内某麻鸭养殖场迅速传播,根据流行病学调查、临床症状、病理变化及相关实验室检测,确诊为新型鹅细小病毒病,通过综合防控有效地控制了该病的流行.文章对此次新型鹅细小病毒病的防控进行了分析总结,以期为该病的防控提供科学参考.

关键词： 猪繁殖与呼吸综合征   猪轮状病毒   副猪嗜血杆菌   混合感染  

摘要： 2024年5月19日,汨罗市某猪场从外地引入的仔猪中部分出现了咳嗽和腹泻的症状,还有仔猪陆续死亡.使用泰妙菌素、阿莫西林和维生素C等药物进行联合治疗,但效果不佳,直至6月7日有60％的仔猪出现腹泻等症状.经现场观察、病理剖检和实验室检测,诊断为猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪轮状病毒混合感染并继发副猪嗜血杆菌病.通过采取在饲料和饮水中添加药物、对症治疗、控制环境温度、紧急免疫等综合措施,截至6月13日,猪场疫情得到有效控制,生产恢复正常.

关键词： 滇中高原   云南松   土壤微生物   氮沉降  

摘要： [目的]探究氮沉降下滇中高原云南松土壤化学性质及土壤微生物群落多样性和结构组成的变化特征,并分析土壤微生物与土壤化学性质的相关关系,为了解氮沉降下森林土壤生态系统养分循环变化趋势及观测土壤微生态变化提供科学依据。[方法]选取滇中高原云南松林土壤为研究对象,以CO（NH2）2为N源,设置对照CK[N0g/（m2·a）],低氮LN[N10g/（m2·a）],中氮MN[N20g/（m2·a）]和高氮HN[N25g/（m2·a）]4个不同梯度进行模拟N沉降试验,测定分析土壤细菌、真菌群落结构及多样性和土壤p H、有机碳（TOC）、全氮（TN）、全磷（TP）、铵态氮（NH4+-N）和硝态氮（NO3--N）的变化特征。[结果]（1）在不同季节下,与CK相较各氮处理下土壤pH、TOC含量均降低,TN均升高,NH4+-N和NO3--N均在MN、HN处升高;（2）细菌和真菌α多样性雨季均高于旱季;与CK相较细菌α多样性在两种季节下LN处上升,而真菌α多样性则在旱季LN处上升;（3）在旱季和雨季细菌优势菌门均为变形菌门、酸杆菌门和放线菌门,真菌优势菌门为担子菌门、子囊菌门和被孢菌门;（4）在旱季和雨季,细菌和真菌优势菌属会与pH、TOC、TN、NO3--N呈显著相关关系。[结论]氮沉降可以为土壤微生物提供NH4+-N和NO3--N等有效养分,但由于氮沉降导致土壤酸化会使土壤TOC含量降低,影响土壤微生物群落结构。

关键词： 云南松松塔粗提物   拉沙病毒   抗病毒活性   抗病毒机制  

摘要： 目的 研究云南松松塔粗提物抗拉沙病毒（LASV）活性及机制。方法 利用拉沙假病毒系统及拉沙细胞-细胞融合检测松塔粗提物抗LASV活性。其中,构建拉沙假病毒系统以慢病毒骨架质粒***.R-E.与含有拉沙包膜蛋白质粒转染于293T细胞,生成了一种含有荧光素酶报告基因的假性拉沙病毒。可以在BSL-2级生物安全实验室中检测松塔粗提物抗LASV活性的研究。其次,拉沙细胞-细胞融合模型的构建是通过对已有的质粒进行酶切,连接,鉴定,获得重组质粒,编码带有荧光报告基因及拉沙包膜蛋白的质粒（PAAV-EGFP-Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ）将其转染至293T细胞,获得表面表达有拉沙包膜蛋白的荧光细胞,与靶细胞huh7细胞混合铺于96孔板,在37℃,酸性件下发生膜融合,后续用膜融合系统来检测松塔粗提物抗LASV活性研究;对松塔粗提物作用于LASV假病毒感染的具体时期进行分析,通过time of addition及time of remove试验分析松塔粗提物抗病毒作用靶点;采用Weston-blot方法检测p24蛋白量,判断松塔粗提物对病毒的裂解作用。结果松塔粗提物可有效抑制LASV感染,用4个谱系的LASV假病毒（LASV lineagesⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ）感染靶细胞,测得IC50值分别为:42.06μg/mL、22.26μg/mL、80.57μg/mL及19.32μg/mL,抑制LASV包膜蛋白（GPC）介导的细胞-细胞融合活性的检测,测得IC50值分别为:122.9μg/mL、64.43μg/mL、90.05μg/mL及195.6μg/mL;松塔粗提物具有广谱抗病毒作用,可有效抑制沙粒病毒属:淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒、卢霍病毒及胡宁病毒假病毒感染,IC50值分别为:2.716μg/mL、12.02μg/mL、29.95μg/mL;松塔粗提物作用于LASV假病毒感染早期,于感染后2 h内加入粗提物的抑制率明显高于4 h后加入药物,且以阻断LASV假病毒的吸附及融合为主;松塔粗提物对LASV假病毒无裂解作用,提取物处理组测得p24蛋白含量与未处理组无显著差异。结论 本研究证实云南松松塔粗提物在体外环境下可有效抑制LASV感染,且具有广谱抗病毒作用;经试验结果证实松塔粗提物主要作用于病毒感染早期,以阻断病毒的吸附及融合为主,为松塔提取物抗LASV的深入研究提供重要的参考依据。

关键词： 气候变化   生态系统   生态功能   青藏高原  

摘要： 近40年来，气候变化导致青藏高原暖湿化，对森林、灌丛、草地、湿地和荒漠等生态系统的地理分布格局和功能产生了明显影响。灌丛、草地和湿地分布范围扩大、边界向西和高海拔区域扩展。气候变化影响下，青藏高原生态系统生产力、固碳和土壤保持能力得到改善，水源涵养变化在空间上表现出显著的异质性。气候变化对植物物候、植物生长速率、动植物分布范围和物种相互作用，以及生物多样性的显著影响，还有待更深入观测与研究。

关键词： 猴痘病毒   全基因组测序   扩增子测序   宏基因测序  

摘要： 目的 比较扩增子与宏基因组测序在猴痘病毒全基因组测序考核中的应用效果,为猴痘病毒测序溯源与疫情防控提供技术参考。方法 扩增子测序:对猴痘DNA先进行全基因组靶向扩增,再对扩增产物进行二代测序;宏基因组测序:对猴痘DNA直接进行二代测序。获得序列后使用CLC、IGV等软件分析2种不同测序方法的有效数据百分比、测序深度及不同测序深度下的病毒全基因组测序覆盖度等质量参数,评估测序质量。使用Nextclade进行病毒分型、序列突变及缺失情况分析,比较2种测序方法所获得序列的一致性及完整性。结果 使用猴痘参比毒株MPXV-M5312＿HM12＿Rivers全基因序列(GenBank登录号:NC＿063383.1)进行拼接后,扩增子测序和宏基因测序所获得有效数据百分比分别为99.72%和7.54%,测序深度范围分别为0×～334 839×和44×～1 000×,测序深度10×以上的位点覆盖度分别为90.3%和100%。通过IGV查看全基因组在不同测序深度下的覆盖情况发现,宏基因测序的全基因组位点测序深度覆盖均匀,而扩增子测序的全基因组位点测序深度覆盖不均、差异明显。病毒分型及序列一致性分析显示,2种方法所获得序列均为猴痘病毒Ⅱb B.1分支,与参比序列相比宏基因测序结果存在73个突变位点,扩增子测序存在68个突变位点,深入分析发现扩增子测序有7个Ⅱb B.1分支的共有突变位点未测到,还存在2个假阳性私有突变位点。结论 在猴痘病毒全基因测序中可灵活使用扩增子测序或宏基因组测序方法,其中扩增子测序可以获得更多的有效数据量,而宏基因组测序在序列覆盖的均一性和准确性方面较好,本研究旨在为提高猴痘病毒全基因组测序成功率提供一点启发与技术参考。

关键词： 龟纹瓢虫   胰岛素信号通路   时空表达模式   qRT-PCR  

摘要： 【目的】明确龟纹瓢虫Propylea japonica胰岛素信号通路中4个关键基因序列结构和时空表达模式。【方法】基于龟纹瓢虫全基因组序列数据，选择E(sev)2B, TOR, PDK1和PI3K 4个基因全长进行结构分析，并通过qRT-PCR检测其在龟纹瓢虫雌虫不同发育时期（羽化后第1、3、5和7天）、不同组织（头、胸、腹和肠）中的表达模式。【结果】E(sev)2B、TOR、PDK1和PI3K基因表达水平均在成虫羽化后第7天显著上调（P <0.05），达到最高水平；E(sev)2B和PI3K基因在龟纹瓢虫羽化后第1、3和5天肠中表达水平均显著高于头、胸和腹部（P<0.05）;TOR基因在羽化后第1天成虫的胸、腹、肠中表达水平均显著高于头部（P<0.05）;PDK1基因在羽化第3天和第5天肠中表达水平最高，且显著高于头、胸和腹部（P <0.05）。【结论】E(sev)2B、TOR、PDK1和PI3K基因在龟纹瓢虫不同发育时期及不同组织中的表达量存在差异，为进一步研究胰岛素信号通路在龟纹瓢虫生殖发育中的作用奠定了基础。