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关键词： 生态护岸   河流生态系统   评价指标体系   博弈论   组合赋权法  

摘要： 为解决生态护岸对河流生态系统影响评价指标体系中的权重分配问题，提出一种基于博弈论的组合赋权方法。该方法将层次分析法和熵权法计算所得权重进行最优组合得到综合权重，兼顾专家的主观判断和数据的客观性。上述评价体系应用于江苏省新孟河界牌枢纽工程，结果表明新型生态护岸对该河段河流生态系统的修复效果明显优于原生态护岸。研究成果可为长江下游平原河网地区的生态护岸建设提供相关指导作用。

关键词： 汉滩病毒   抗微生物肽   抗病毒   作用机制   包膜糖蛋白  

摘要： 目的 探讨基于人工智能设计的抗微生物肽（AMPs）Perceptide-TJ-2对汉滩病毒（HTNV）感染的抑制作用及主要抗病毒机制。方法 利用免疫荧光、qRT-PCR、Westernblotting等技术，检测在不同感染时间点，Perceptide-TJ-2处理病毒或宿主细胞后病毒的表达情况。同时，通过上述方法验证Perceptide-TJ-2在感染早期吸附和穿入阶段的作用。此外，利用表面等离子共振实验证实了Perceptide-TJ-2和HTNVGn蛋白之间的相互作用，并通过分子对接模拟了Perceptide-TJ-2和HTNVGn之间的结合情况。结果 感染前对宿主细胞或HTNV病毒进行肽预处理，或在感染过程中加入肽和病毒，均能有效抑制HTNV的感染。进一步研究发现，Perceptide-TJ-2主要在病毒吸附阶段发挥抑制作用，其机制是Perceptide-TJ-2肽能够结合HTNVGn蛋白，从而阻止病毒入侵宿主细胞。结论研究结果表明，Perceptide-TJ-2具有显著的抗HTNV感染活性，其主要机制为通过结合HTNV Gn蛋白，阻碍病毒与宿主细胞的结合，从而发挥抗病毒作用。该研究为开发新型抗HTNV感染的AMPs药物提供了潜在的方案。

关键词： 采煤地表塌陷   裂缝发育   土壤理化性质   土壤微生物群落   养分循环  

摘要： 厘清煤炭井工开采造成的不同地表裂缝发育类型土壤理化性质和微生物群落结构特征，并揭示关键影响因子，可为矿区针对性生态修复措施的实施提供理论依据。以半干旱榆神府矿区黄土塌陷地拉伸型和塌陷型两种裂缝类型为研究对象，在阐明两种裂缝类型土壤理化性质、微生物群落组成和多样性特征的基础上，运用冗余分析揭示其与土壤理化因子的关系，并基于细菌和真菌群落中功能微生物丰度变化来预测裂缝发育对土壤环境功能的影响。结果表明：较未塌陷地，塌陷型裂缝土壤容重、含水率和有机质分别显著减小了12%、21%和52%（P<0.05），土壤速效氮和速效磷含量分别降低了64%和15%，pH升高了4%，拉伸型裂缝土壤速效氮、速效磷、速效钾分别显著下降31%、15%和12%（P<0.05），其余土壤理化指标变化不显著（P>0.05）；塌陷型裂缝发育使得土壤细菌群落丰富度、多样性和均匀度分别下降14%、3%和5%（P<0.05），拉伸型裂缝发育使得土壤细菌丰富度指数和多样性指数分别显著降低6%和3%（P<0.05），但拉伸型裂缝地真菌群落多样性和均匀度指数分别显著上升了8%和9%（P<0.05），而塌陷型裂缝发育仅使得土壤真菌多样性指数降低20%，其余指标并无显著变化。土壤含水率、有机质和速效养分都是驱动研究区微生物群落变化的核心因子，土壤理化性质的改变也影响了土壤微生物环境功能表达，塌陷型裂缝发育区参与土壤氮循环与碳循环功能相关基因相对丰度显著降低，而拉伸型裂缝表现出相反趋势，且塌陷型裂缝土壤真菌更倾向于病理-腐生-共生营养型，拉伸型裂缝区土壤中真菌倾向于营植物腐生-木腐型。这些结果可为采煤沉陷区生态修复提供理论依据。（图7 表2 参55）

关键词： 年龄鉴定   甲壳动物   生长带   眼柄   胃磨  

摘要： 【背景】甲壳动物是渔业和水产养殖业中一类具有重要商业价值的生物资源。近些年来,由于某些传统渔业的衰退和人类对高蛋白食物需求的增长,甲壳动物如蟹、龙虾、虾、磷虾等资源被大量开发。因此,亟需发展甲壳动物的资源评估和管理工作,以维持其资源的可持续发展,但甲壳动物年龄鉴定的困难阻碍了这项工作的开展。目前,鉴定甲壳动物年龄的方法有许多种,主要包括饲养法、标记重捕法、体长频次法、脂褐素分析法、放射性同位素法以及硬组织生长带计数法等,其中硬组织生长带计数法被广泛应用,备受关注。【进展】基于以上背景,本文首先介绍了甲壳动物的生物学特性和硬组织结构,阐述利用硬组织生长带计数法鉴定水生甲壳动物年龄的主要实验过程,与以往水生甲壳动物年龄鉴定方法进行对比,分析该方法的优点和缺点,并对利用硬组织生长带分析水生甲壳动物年龄与生长的研究进展进行回顾,对该方法未来需要进一步解决的问题和发展方向作出展望。【展望】在未来水生甲壳动物年龄鉴定的工作中,需进一步了解生长带沉积机制,准确掌握硬组织生长带的计数,深入分析所获得的实验数据,并开展相关的验证实验等。【意义】本文可为水生甲壳动物的年龄鉴定工作提供一个系统的参考。

关键词： 新型冠状病毒感染肺炎   恢复期   免疫紊乱   动物模型  

摘要： 目的 建立一种稳定可复制、高度模拟新型冠状病毒感染肺炎(novel coronavirus pneumonia,NCP)恢复期患者的小鼠模型。方法 将30只Balb/c雌性小鼠,随机分为对照组和感染后第1、3、7、10天组,共5组(n=6),感染组小鼠予SARS-CoV-2病毒棘突(Spike,S)蛋白原液气管滴注进行感染,分别于感染后第1、3、7、10天取材,依次标记为D1S组、D3S组、D7S组、D10S组;对照组(N组)进行假手术,第10天取材。采用免疫荧光双染法观察S蛋白与肺组织ACE2受体结合情况;HE染色观察小鼠的肺组织病理,RT-qPCR测定小鼠肺组织中IL-4、IL-6 mRNA表达;流式细胞术检测小鼠脾脏CD4^(+)T淋巴细胞中Th17/Treg、Th1/Th2细胞比值、DC细胞中cDC、pDC、CD80^(+)、CD86^(+)细胞比例。结果 荧光双染色结果提示S蛋白和血管紧张素转化酶2(ACE2)可在气道上皮细胞中位置重合;HE染色结果显示,与N组相比,D1S组小鼠肺部组织结构紊乱,上皮细胞变性、塌陷,肺泡损伤,伴间质水肿和炎性浸润,而D3S、D7S及D10S组小鼠则呈现逐渐恢复的状态,D10S组小鼠肺组织相较于对照组还存在一些轻微的病理损伤;与N组比较,IL-4 mRNA含量在D1S组小鼠无明显变化(P>0.05),但在D10S组小鼠肺组织中明显升高(P<0.01),而IL-6 mRNA含量在D1S组小鼠显著升高(P<0.01),且在D3S组及D10S组有所降低(P<0.01),但D10S组小鼠IL-6 mRNA水平相较于N组仍有升高(P <0.05);流式细胞术结果显示,与N组比较,D10S组小鼠Th17/Treg显著增加(P<0.01)、Th1/Th2比值显著降低(P<0.05);相较于N组,D10S组小鼠中cDC、CD80^(+)、CD86^(+)细胞比例均有所减少(P<0.05),而D10S组小鼠pDC细胞比例则无明显改变(P>0.05)。结论 D10S组小鼠肺部病理、炎症因子、免疫细胞相关指标变化符合NCP恢复期的临床特征,S蛋白滴鼻可模拟NCP小鼠模型,为新型冠状病毒感染恢复期的研究奠定了基础;NCP恢复期患者仍存在机体损伤及免疫功能紊乱等问题,提示新型冠状病毒感染后机体损伤的长久性与康复治疗的重要性。

关键词： 宏基因组   非酒精性脂肪肝   肠道菌群   膳食结构  

摘要： 非酒精性脂肪肝病是世界范围内的主要代谢类疾病之一,其与肠道菌群联系紧密。由于大量关于非酒精性脂肪肝病肠道标志物研究结果的不均一性,因此需要考虑是否是饮食差异所导致的。该研究纳入30名不同饮食结构的非酒精性脂肪肝病患者,分为15名高脂肪膳食摄入患者和15名高碳水膳食摄入患者,基于宏基因组学测序方法研究患者的肠道菌群。结果发现,2种膳食模式下的非酒精性脂肪肝病患者肠道菌群存在显著差异,在种水平上,长期高碳水摄入的患者肠道菌群以梭菌为主,长期高水平脂肪摄入者的肠道优势菌群则主要是普拉梭杆菌(Feacalibacterium prausnitzii);在功能上,高脂肪摄入患者富集在胆酸代谢通路上,而高碳水摄入患者富集在棕榈酸酯合成通路上。这一研究对未来的非酒精性脂肪肝动物特异性造模和进一步科学合理地指导非酒精性脂肪肝患者合理膳食有一定意义。

关键词： 水稻草状矮化病毒   外壳蛋白   载体构建   酵母双杂交   亚细胞定位   双分子荧光互补   蛋白互作  

摘要： 【目的】明确水稻草状矮化病毒(Rice grassy stunt virus,RGSV)外壳蛋白CP的自身互作,为揭示CP蛋白在RGSV侵染中的功能提供理论依据。【方法】利用酵母双杂交(Y2H)技术鉴定RGSV CP与CP蛋白之间的互作。提取感染RGSV水稻叶片的总RNA,通过RT-PCR扩增得到CP基因。将CP基因分别构建到酵母表达载体pGBKT7和pGADT7上,利用菌液PCR鉴定阳性克隆。将酵母质粒组合pGBKT7-CP/pGADT7、pGBKT7-CP/pGADT7-CP、阳性对照pGADT7-T/pGBKT7-53、阴性对照pGADT7-T/pGBKT7-Lam分别转化到酵母感受态细胞Y2HGold中,先后涂布于缺陷型培养基SD/-Leu/-Trp和SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp/X-α-gal上。通过观察酵母细胞在缺陷培养基上的生长和显色情况鉴定CP蛋白的毒性、自激活活性和自身互作关系。利用亚细胞定位和双分子荧光互补(BiFC)鉴定CP在本氏烟中的定位及互作。将CP构建到植物瞬时表达载体pEarleyGate101(101)、pEarleyGate202-YN(YN)、pEarleyGate202-YC(YC)上,并利用菌液PCR鉴定阳性克隆。将阳性克隆101-CP、YN-CP、YC-CP、空载体YN、YC分别转化到农杆菌GV3101中。将含阳性质粒101-CP的农杆菌单独注射本氏烟叶片;将含阳性质粒YN-CP/YC-CP、阴性对照YN-CP/YC、YN/YC-CP的农杆菌共注射本氏烟叶片;利用激光共聚焦显微镜观察融合蛋白的发光和定位。【结果】RT-PCR扩增得到CP基因,其大小为978bp。成功构建酵母表达载体pGBKT7-CP和pGADT7-CP。含质粒pGBKT7-CP/pGADT7、pGBKT7-CP/pGADT7-CP、阳性对照和阴性对照的酵母菌均能在缺陷培养基SD/-Leu/-Trp平板上生长,且含质粒pGBKT7-CP/pGADT7的酵母菌的生长情况与对照一致,说明CP蛋白对酵母菌无毒性。但仅含质粒pGBKT7-CP/pGADT7-CP的酵母菌和阳性对照可在缺陷培养基SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp/X-α-gal平板上生长并显色,表明CP蛋白无自激活活性,且CP蛋白在酵母细胞中能够自身互作。成功构建CP基因的植物表达载体;亚细胞定位结果显示,CP蛋白主要定位于本氏烟细胞的细胞核和细胞膜上。BiFC结果显示CP存在自身互作,且互作也定位于本氏烟细胞的细胞核和细胞膜。【结论】水稻草状矮化病是由水稻草状矮化病毒引起的,给粮食产量造成了严重威胁。RGSVCP是该病毒的外壳蛋白,可能在病毒复制、装配、侵染等过程中发挥着重要的作用。通过亚细胞定位、Y2H和BiFC鉴定了RGSVCP的定位和自身互作,为CP蛋白的功能研究提供参考,为解析RGSV的致病机制提供依据。

关键词： 针刺   卒中相关性肺炎   机制   神经炎症   炎性   免疫机制   误吸   肠道菌群  

摘要： 针刺治疗卒中相关性肺炎(stroke associated pneumonia, SAP)具有明显优势。笔者对针刺治疗SAP的作用机理进行归纳、概括和总结,主要聚焦于以下四个方面:调节神经炎症相关的多种炎症信号通路、改善卒中诱导的免疫抑制、抑制炎症反应、防治误吸以及调节肠道菌群。针刺可通过多途径、多靶点、多层次综合调节机体功能,抑制炎症反应,提高机体免疫功能,减少误吸,促进肠道组织结构恢复,起到维护肠道内微生物稳态的作用,最终达到提高SAP患者的临床疗效和生存质量的目的。目前,针刺改善SAP的机制研究取得了一些积极的成果,后期可深入研究作用机理的靶点,再进行综合研究,以进一步探索针刺治疗SAP的机制,为临床应用提供参考依据。

关键词： 厚壳贻贝   生长   微生物   群落结构   贻贝肽  

摘要： 为探究海洋生物活性肽对厚壳贻贝(Mytilus coruscus)生长发育的影响,本研究以厚壳贻贝稚贝为实验对象,通过投喂不同浓度的贻贝肽(0、7、9、10、70和90 mg/L),测定壳长、壳高、湿重等指标,以确定最适贻贝肽浓度,并对投喂前后的稚贝微生物群落进行分析,实验周期为56 d。结果显示,相较于未投喂贻贝肽的对照组,投喂9 mg/L的贻贝肽显著促进稚贝生长,且壳长、壳高和湿重分别提升了27.37%、32.35%和115.49%;同时发现,高浓度贻贝肽(70 mg/L和90 mg/L)对厚壳贻贝稚贝产生了致死效应。通过16S rRNA基因扩增和测序对比分析了28 d和56 d贻贝肽投喂组与未投喂组的厚壳贻贝稚贝微生物组群落结构变化。研究结果显示,投喂9 mg/L贻贝肽改变了稚贝微生物群落结构组成,提高了拟杆菌门(Bacteroidota)和变形菌门(Proteobacteria)的丰度,降低了放线菌门(Actinobacteriota)的丰度;同时,属水平分析发现,贻贝肽投喂组有效增加了鲁杰氏菌属(Ruegeria)、黏着杆菌属(Tenacibaculum)、居海杆菌属(Maribacter)、栖砂杆菌属(Arenibacter)、十八碳杆菌属(Octadecabacter)和希瓦氏菌属(Shewanella)等有益菌的物种丰度,显著减少了红球菌属(Rhodococcus)、气单胞菌属(Aeromonas)等潜在致病菌的丰度。综上,贻贝肽能有效促进厚壳贻贝的稚贝生长发育,并且可以优化厚壳贻贝微生物群落结构,研究成果将为后续开展贻贝肽等海洋生物活性肽对贝类稚贝中间培育以及海水贝类养殖可持续发展提供基础和数据支撑。