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关键词： 呼吸道合胞病毒   CRISPR-Cas12a技术   酶促重组等温扩增   即时检测   核酸检测  

摘要： 【目的】呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus, RSV）是婴幼儿急性呼吸道感染的最常见原因。基于RT-ERACRISPR/Cas12a技术，建立一种RSV快速特异性的检测方法。【方法】针对RSV N基因保守区域设计合成特异性crRNA及酶促重组等温扩增（ERA）引物，筛选最佳扩增引物-crRNA组合建立检测体系；通过荧光法检测RSV核酸，确定检测方法的灵敏度及特异性。【结果】根据Cas12a的激活原理，针对A型及B型RSV分别设计合成RSV-crRNA1及RSV-crRNA2，二者混合加入检测体系，可同时检测到A型及B型RSV，并具有协同作用；实验筛选出一组最佳引物组合（RSV-F+RSV-R3J），最低检出限为5×10～2 copies/mL，可在39℃恒温条件下，35 min内完成检测；该方法与其他核酸测试样本无交叉反应，只能检测出RSV核酸，具有较高的特异性。【结论】基于RT-ERA-CRISPR/Cas12a技术，成功建立了一种灵敏度高、特异性强、快速、低成本的RSV核酸检测方法，该方法不依赖复杂的检测仪器，任何能够提供恒温环境和检测荧光信号功能的仪器均可适用。因此，该方法适用于RSV即时检测，还可能应用于其他病原体感染的检测。

关键词： 人偏肺病毒   假病毒   阳性标准品  

摘要： 为制备一种安全、有效的人偏肺病毒（Human metapneumovirus,HMPV）假病毒阳性标准品，并用于核酸检测的质量控制，本研究对335条HMPV全基因序列比对分析，选择HMPV基因表达量高且进化较为保守的N基因构建重组假病毒颗粒。合成全长1185 bp的N基因序列并与CD513B载体进行重组连接，采用第三代慢病毒包装体系构建HMPV假病毒颗粒，超速离心浓缩后感染HEK293T细胞，RT-qPCR核酸检测N基因和透射电镜观察鉴定重组假病毒颗粒，确定假病毒阳性标准品使用浓度，进一步评价阳性标准品的热稳定性和均一性。研究结果显示，包装获得的HMPV假病毒颗粒能够感染HEK293T细胞，假病毒颗粒为圆形或椭圆形病毒样结构，直径在150～200nm之间，并带有G蛋白刺突。HMPV假病毒稀释103倍后Ct值最适于进行核酸检测，并且均一性和稳定性可达到阳性标准品要求。本研究成功构建了含有HMPV N基因全长的假病毒颗粒，可作为核酸检测方法的阳性标准品，实现HMPV核酸提取和核酸检测过程的全程质量控制。

摘要： 自2019年底新型冠状病毒（SARS-CoV-2）引发的肺炎（COVID-19）疫情大流行以来,全球已有超过7.6亿人感染,造成695万人死亡,对全球健康和经济造成了严重影响[1]. SARSCoV-2通过其刺突蛋白（Spike, S）与宿主细胞表面的血管紧张素转换酶2（angiotensin-converting enzyme 2, ACE2）受体结合,进而通过内吞作用或细胞膜融合实现入侵[2,3].

关键词： 猪丁型冠状病毒   微滴式数字PCR   荧光定量PCR  

摘要： 为建立一种检测猪丁型冠状病毒（PDCoV）的微滴式数字PCR定量方法，选择猪丁型冠状病毒M基因作为靶基因，设计并合成1组引物对和探针，并对反应体系及退火温度进行优化。结果显示，所建立的微滴式数字PCR定量方法检测猪丁型冠状病毒M基因的最低限为1.37 拷贝/μL，当模板浓度为100～104拷贝/μL范围内与检测值具有良好的线性关系(R2>0.99)；检测的批内、批间变异系数为0.63%～4.63%，均低于5%，检测10种猪常见疫病病原（PEDV、PRV、TGEV、SADS-CoV、PoRV、PPV、PRRSV、PCV2、CSFV、FMDV-O、FMDV-A）核酸均为阴性；对130份临床样品进行猪丁型冠状病毒检测，微滴式数字PCR方法敏感性高于行业标准推荐的荧光PCR方法。本研究成功建立了一种特异性强、灵敏度高、重复性好的猪丁型冠状病毒微滴式数字PCR定量检测方法，为猪丁型冠状病毒的早期检测、定量诊断以及疫病净化提供技术保障。

关键词： 生态系统服务   生态分区   权衡协同   甘肃省  

摘要： 以西北生态脆弱区甘肃省为研究对象，基于自然地理和社会经济数据，运用InVEST模型、CASA模型和ArcGIS空间分析等方法分析甘肃省生态服务功能及其权衡协同关系，探讨权衡协同关系下生态功能分区的优化方案。结果表明：（1）2000—2020年，由于退耕还林等大规模生态建设工程促使甘肃省生态功能较强的林地、草地、河流水面、湖泊水面等地类增加，固碳量、生境质量、土壤保持和产水量4种生态服务均呈现出波动上升趋势。（2）权衡协同关系中，生境质量-产水量、固碳量-产水量、生境质量-土壤保持表现为中等协同关系，土壤保持-固碳量、土壤保持-产水量、生境质量-固碳量表现为强协同关系。（3）利用K-means聚类将甘肃省划分经济-文化发展区、生境质量-固碳优先区、土壤保持-固碳优先区、生物多样-土壤保持区、水土综合保育区和生态服务综合保育区6种生态分区，将权衡协同关系纳入生态系统服务簇分区优化，需优化区占全省面积的3.07%。通过综合分析生态服务相似性和差异性，形成生态系统服务簇后充分考虑其分区内部的权衡协同关系，对传统生态分区进行优化调整，提出增强协同、缓解权衡的空间差异化治理措施。

关键词： 乙型肝炎病毒   miR-183-5p/THBS1轴   肝癌细胞   增殖   迁移   侵袭  

摘要： 乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus,HBV）是一种嗜肝性非细胞病变DNA病毒，可导致肝硬化、肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）等严重的肝脏疾病。目前认为HBV诱导的HCC涉及病毒因素和多个宿主因素之间复杂的相互作用。环状RNA(circRNA)是一种新型非编码RNA分子，在肿瘤的发生、发展中有重要的调控作用。有研究表明circRNA THBS1通过吸附miR-129-5p调控基因SOX4的表达促进非小细胞肺癌细胞的迁移和侵袭。然而，circRNA THBS1在肝癌中的作用机制尚不清楚。miRNA在多种癌症中作为致癌物或抑癌因子调控肿瘤的形成。本研究拟探究HBV对肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响和具体作用机制，CCK8和Transwell实验探究HBV对HepG2细胞增殖、迁移和侵袭的影响；双荧光素酶报告验证miR-183-5p和THBS1的关系；qRT-PCR检测miR-183-5p和THBS1 mRNA水平；Western-blot检测增殖、迁移相关蛋白PCNA、MMP2和MMP9水平。在本研究中，用含HBV基因组的腺病毒感染HepG2细胞记为HBV组，正常HepG2细胞记为NC组。将过表达miR-183-5p、过表达miR-183-5p+沉默THBS1病毒载体转染至HBV感染的HepG细胞中，记为miR-183-5p过表达组、miR-183-5p+THBS1沉默组。与NC组相比，HBV组内miR-183-5p表达水平降低，THBS1表达水平升高，HepG2细胞增殖、迁移和侵袭能力显著增强；与HBV组相比，miR-183-5p过表达组、miR-183-5p+THBS1沉默组HepG2细胞增殖、迁移和侵袭能力被显著抑制。乙型肝炎病毒通过降低miR-183-5p表达上调THBS1，进而促进肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

关键词： 季节性流感病毒   神经氨酸酶抑制剂   巴洛沙韦   IC50值   敏感性  

摘要： 为了解我国大陆流行的季节性流感病毒对抗流感病毒药物的敏感性，本文对2023-2024流感监测年度分离的季节性流感病毒进行了神经氨酸酶抑制剂和巴洛沙韦的耐药检测。基于表型方法检测的5341株季节性流感毒株中，9株A(H1N1)pdm09亚型对Oseltamivir敏感高度降低，NA基因上有H275Y位点的变异；2株B/Victoria系对Oseltamivir和Zanamivir敏感性均降低，NA基因上分别有I348T和D197N位点的变异。基于基因型方法检测的1207株季节性流感毒株中，1株A(H1N1)pdm09亚型在PA基因上有K34R和E198K位点的变异，2株A(H3N2)亚型在PA基因上有L28P位点的变异，提示对巴洛沙韦的敏感性降低。因此，上述监测数据表明2023-2024年我国大陆流行的季节性流感病毒总体上对神经氨酸酶抑制剂和巴洛沙韦敏感，这两类药物依然是治疗流感病毒感染的适当选择，而密切监测病毒对抗病毒药物的敏感性是必要的。

关键词： 转基因鸡   慢病毒载体   显微注射   绿色荧光蛋白  

摘要： 由于禽类独特的生殖生理特点和胚胎发育的复杂性，笔者利用慢病毒载体与鸡胚血管显微注射法相结合，以期探寻出一种简便、有效的制备转基因鸡的方法。对发育至第14～15期鸡胚，于卵黄外周静脉血管显微注射1 μL病毒滴度为1×109TU/mL携带由人源性泛素启动子C调控的eGFP慢病毒，试验共操作了76枚胚胎，出雏44只，孵化率为57.9%（44/76）。结果显示，经检测，在G0代雏鸡的喙部、眼部、羽毛、大脑、胸肌、肺、腺胃、肠、脾、肝、心脏、肾中均观测到绿色荧光蛋白广泛性表达；在随机抽检G0代7只小鸡的性腺中，均观测到绿色荧光蛋白超强表达100%（7/7）；对发育到性成熟期的母鸡和公鸡随机抽样解剖，观测到睾丸和卵巢的卵泡中绿色荧光蛋白的广泛性表达；对G1代 60只雏鸡经PCR检测发现14只为阳性，阳性率为23.3%（14/60），Southern-blot检测结果进一步证实为阳性。结果表明，利用该方法成功生产出转基因鸡，为家禽基因组编辑创立了一种方便快捷、高效稳定的新方法。

摘要： 1 分类学发展瓶颈问题 植物分类学是一门发展相对成熟又是以描述为主的学科。随着各类植物志或有关专著等工作的完成，学科发展遇到了“瓶颈”，甚至成为了需要扶持或“拯救”的学科。

关键词： 槲皮素   SIRT1/FoxO3信号通路   柯萨奇B3病毒   病毒性心肌炎  

摘要： 柯萨奇病毒B3 (Coxsackievirus B3,CVB3)是一种小核糖核酸病毒科肠道病毒，被认为是人类病毒性心肌炎（Viral myocardialtis, VMC）的主要病原体。VMC是青壮年心衰的重要原因，因此VMC严重影响着年轻健康人的身心健康。槲皮素具有抗氧化、抗炎、降血糖等多种生物活性。本研究拟通过腹腔注射CVB3法建立VMC小鼠模型。将小鼠随机分为模型组、模型+槲皮素低剂量组（20mg/kg）、模型+槲皮素高剂量组（80mg/kg）、模型+槲皮素+EX527(SIRT1抑制剂，1μg/kg)组，每组15只，另设正常小鼠为对照组。采用Vevo770成像系统检测小鼠心功能，HE染色观察小鼠心肌组织病理学变化，ELISA实验检测小鼠血清内相关心肌损伤标志物和氧化应激水平，Tunel染色检测小鼠心肌组织细胞凋亡情况，Western blot检测小鼠心肌组织内SIRT1、FoxO3、Caspase3蛋白表达情况。与对照组相比，CVB3感染后小鼠心功能明显下降，心肌组织病理损伤明显，心肌损伤标志物水平、氧化应激水平和心肌细胞凋亡数显著上升，SIRT1、FoxO3表达下调，Caspase3表达上调。而槲皮素治疗后，小鼠心功能明显恢复，心肌组织病理损伤被抑制，心肌损伤标志物水平、氧化应激水平和心肌细胞凋亡数显著下降，SIRT1、FoxO3表达上调，Caspase3表达下调，而EX527逆转了槲皮素的治疗作用。槲皮素对CVB3诱导的病毒性心肌炎小鼠具有明显治疗作用，其作用机制可能与SIRT1/FoxO3信号通路有关。