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关键词： 札如病毒   病毒性腹泻   全基因测序   基因型   氨基酸突变  

摘要： 目的 对青海省2023年5岁以下腹泻住院病例开展札如病毒监测，初步研究札如病毒阳性率和流行的基因型别，积累我省札如病毒感染的分子流行病学基础资料。方法 2023年在青海省妇女儿童医院设立监测哨点，按《全国病毒性腹泻监测方案》（2021版）要求开展5岁以下腹泻住院患儿病毒性腹泻监测，采用荧光定量聚合酶链式反应（real-time PCR）方法检测病例样本，筛选阳性且CT值≤32的样本开展全基因组测序，对札如病毒的VP1基因测序结果进行系统发育树分析、同源性分析、平均遗传距离分析和氨基酸变异位点分析。结果 青海省2023年札如病毒监测阳性率3.89%(7/180),VP1基因序列分析显示该株病毒共有6个氨基酸位点发生替换，与中国2013年（MK111629.1）、2014年（MK111630.1）、2015年（MH477433.1）、2016年（KX980412.1）分离株距离相近。该株病毒属于GⅠ.1基因型，是当前我国主要感染基因型。5株参考株之间的核苷酸同源性为93.71%～98.81%，氨基酸同源性为99.29%～99.82%，核苷酸平均遗传距离为0.012～0.067。结论 研究发现青海省2023年札如病毒腹泻流行水平与多个省份2020—2023年报道相近。我省首次利用全基因测序方法鉴定札如病毒基因型，通过序列分析表明该株病毒（23-14）为我国流行的优势毒株。该研究为札如病毒感染的分子演化研究提供了序列参考，为今后对病毒性腹泻病原检测和札如病毒分子流行特征分析提供了参考依据。

关键词： 新型冠状病毒   奥密克戎   监测   分析  

摘要： 目的 分析2023年1月至2024年3月海南省本土病例新冠病毒变异监测资料，掌握优势流行分支动态变化趋势与人群特征，为新冠病毒感染及时预警风险与防控策略制定提供科学指导。方法 收集2023年1月至2024年3月海南省新冠病毒病原学监测网络实验室报送的变异监测数据，并对优势进化分支动态流行趋势、感染病例人群特征、疾病严重程度等进行一般描述性分析。结果 2023年1月至2024年3月，共获得海南省2600例本土病例进化分支信息，均为奥密克戎变异株，涉及115种进化分支；依次经历2023年第01周至2024年第13周BA.5.2.48与BF.7竞争流行、2023年第16周至2023年第52周XBB及其亚分支优势流行、2024年第1周至第13周BA.2.86及其亚分支优势流行三个阶段，伴随OmicronBA.2.75呈小规模散发流行；所有分支感染病例年龄构成中，19-60岁年龄组占比均为第1位，＜4岁年龄组均最低，无明显性别差异，临床疾病严重程度均以无症状及轻型为主。结论 新型冠状病毒不同优势进化分支呈依次替代流行特征，临床疾病严重程度逐渐降低。未来应重点关注61岁及以上老年人群或18～60岁有基础疾病人群，持续加强新冠病毒变异监测与分析，及时掌握优势进化分支动态流行趋势，关注新型变异分支免疫原性及疫苗保护力变化，为疫苗研发、临床治疗、防控与免疫策略制定提供科学指导。

关键词： 微塑料   水生态系统   毒理学影响   去除技术  

摘要： 微塑料作为一类新型水体污染物，正受到越来越多的关注。它们因广泛分布、难以降解以及对生物具有的毒性特性，对淡水生态系统的健康构成了严重威胁。本文综述了微塑料的定义、分类、来源，以及它们在水环境中的分布和迁移模式。同时，探讨了微塑料对水生生物的毒理学影响，以及物理、化学和生物技术在微塑料去除中的应用。微塑料根据类型、尺寸及来源可分为一级微塑料和二级微塑料。综合分析表明，选择合适的微塑料采集和预处理方法，是进行定量定性分析和其他研究的基础。微塑料的分布和迁移受到地理位置、风、水流和流速等因素的影响。研究显示，微塑料通过在其表面吸附有毒化学物质和微生物，对水生生物的生长和繁殖产生毒性效应，甚至影响食物链和水生态系统的健康。针对这些问题，本文综述了物理技术如吸附、膜过滤和沉降，化学方法如凝聚和絮凝过程、氧化、聚合和光催化降解，以及微生物降解等生物方法的应用现状。文章最后从微塑料分析方法、环境毒性研究、去除技术、政策和法规四个方面提出了研究展望。本文旨在为将微塑料指标纳入河湖健康评价体系提供思路和参考，为河湖生态环境的保护和修复提供管理对策依据。

关键词： 液相色谱-串联质谱法   凉茶   非法添加抗病毒药物   基质匹配  

摘要： 提出了液相色谱-串联质谱法测定凉茶中18种非法添加抗病毒药物（盐酸吗啉胍、喷昔洛韦、磷酸奥司他韦、三水合帕拉米韦、扎那米韦、利巴韦林、阿比多尔、法匹拉韦、洛匹那韦、拉尼米韦、盐酸金刚烷胺、盐酸金刚乙胺、玛巴洛沙韦、利托那韦、阿昔洛韦、更昔洛韦、泛昔洛韦、盐酸伐昔洛韦）含量的方法。取凉茶样品1 g置于50 mL容量瓶中，加入40 mL体积比1:3的甲醇-乙腈混合溶液，超声30 min，冷却至25 ℃，用体积比1:3的甲醇-乙腈混合溶液定容，摇匀，过0.22 μm尼龙滤膜，取滤液待测。以Waters ACQUITY BEH HILIC色谱柱为固定相，以不同体积比的含0.1%（体积分数）乙酸的10 mmol·L-1乙酸铵溶液和含0.1%（体积分数）甲酸的乙腈溶液的混合液为流动相进行梯度洗脱，质谱分析采用电喷雾离子（ESI）源，在正离子(ESI+)扫描模式下进行多反应监测（MRM）模式分析，以基质匹配的混合标准溶液绘制工作曲线。结果表明，18种非法添加抗病毒药物的质量浓度在一定范围内与对应的色谱峰面积呈线性关系，检出限（3S/N）为0.005～2.0 mg·kg-1；按照标准加入法进行回收试验，回收率为70.3%～115%，测定值的相对标准偏差（n=6）均小于12%；方法用于387批凉茶分析，有10批凉茶检出金刚烷胺，检出量为0.125～420 mg·kg-1，4批凉茶检出吗啉胍，检出量为177～ 6 404 mg·kg-1。

关键词： 火把花根片   热休克蛋白90   类风湿关节炎   骨破坏  

摘要： 旨在探讨火把花根片抗类风湿关节炎（RA）骨破坏的潜在作用及其分子机制。采用超高效液相色谱-质谱联用技术分析火把花根片的主要成分，并基于主要成分预测其候选靶标基因集。通过GeneCards和遗传学与医学文献数据库（OMIM）获取RA骨破坏的关键靶点，构建蛋白-蛋白相互作用（PPI）网络，并通过拓扑分析确定关键靶点。进一步利用基因本体论（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析揭示火把花根片抗RA骨破坏的分子机制。通过MTS实验评估火把花根片对巨噬细胞活力的影响，筛选无毒浓度。构建核因子κB配体受体激活物（RANKL）诱导的体外破骨细胞分化模型。采用抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色和F-actin染色观察破骨细胞形成和分化情况，同时通过免疫荧光法和Western blot法检测火把花根片对破骨细胞分化体系中核心靶点蛋白变化的影响。结果显示，火把花根片的主要成分包括雷公藤甲素、雷公藤红素、雷酚内酯等14种化合物。进一步网络分析表明，热休克蛋白90（HSP90）是火把花根片抗RA骨破坏的关键靶基因。TRAP染色和F-actin染色结果显示，火把花根片干预后，TRAP阳性多核细胞以及肌动蛋白环的数量和面积呈剂量依赖性降低（P<0.01）。Western blot结果表明，20、40 μg·mL-1火把花根片能显著抑制破骨细胞分化体系中HSP90蛋白的表达（P<0.01），且各剂量组均显著抑制破骨细胞分化体系中肿瘤坏死因子受体相关分子6（TRAF6）、T细胞核因c1（NFATc1）、基质金属蛋白酶9（MMP9）、组织蛋白酶K（CTSK）蛋白的表达（P<0.01）。免疫荧光结果进一步证实，火把花根片明显抑制破骨细胞中HSP90和CTSK水平，以及NFATc1的活化。综上，该研究证实火把花根片可能通过调控HSP90这一关键靶点抑制RANKL诱导破骨细胞分化从而发挥抗RA骨破坏作用，这将为火把花根片防治RA骨破坏提供新的思路。

摘要： 利用生物材料进行表面改性对于构建能够控制细胞行为、调节生物过程并与特定生物分子相互作用的生物活性界面至关重要.单宁酸(tannic acid, TA),作为一种能够与离子络合的天然多酚化合物,其可以与金属离子自组装而形成一种配位网络,即金属-多酚网络(metalphenolic networks, MPN),因而备受关注.这些金属-多酚网络不仅能形成稳定的动态结构,还可根据特定治疗需求进行工程化设计.由于其独特的理化性质,包括优良的粘附性、pH响应性、可控尺寸和刚度、易于制备以及良好的生物相容性,合成的基于单宁酸的金属-多酚结构已被广泛应用于修饰各种生物界面.这对于各种生物应用,特别是在细胞治疗中,具有极大的优势.本文探讨了基于单宁酸的金属-多酚网络在治疗性细胞(包括细菌、酵母和哺乳动物细胞)背景下的合成、性质与应用,重点阐述了其在生物相容性、可降解性、调节细胞环境能力及临床转化等方面的优势,强调了基于单宁酸的金属-多酚网络在推动细胞疗法方面的潜力.

关键词： 生态系统服务价值   土地利用   时空变化   烟台市  

摘要： 为了合理优化烟台市土地利用结构,提高城市生态系统服务价值,本文以烟台市1990—2020年间4期的土地利用数据为基础,采用当量价值评价法等,分析研究区近30年生态系统服务价值的时空变化特征。研究表明:1990—2020年,烟台市主要土地类型为耕地、林地和建设用地,占土地总面积90%以上,建设用地动态变化最显著,动态度为2.51%,2010—2020年综合土地利用动态度最高,为0.45%;1990—2020年烟台生态系统服务价值总量逐年下降,耕地和草地生态系统服务价值显著减少(23.47亿元),林地和水体明显增加(21.22亿元);1990—2020年生态系统服务价值呈东高西低格局,城市化使建设用地扩张,生态系统服务价值低的区域从城区向周边扩散,高值区在海岸线及高海拔山地,虽受海水侵蚀和“退耕还林”政策的影响,部分区域面积增加,但整体生态系统服务价值仍在下降。

关键词： 生态系统多功能性   植物多样性   藏北高寒草地   围栏封育与自由放牧   平均值法   多阈值法  

摘要： 本研究选择藏北高原降雨梯度带四种类型高寒草地（高寒草甸、高寒草甸草原、高寒草原、高寒荒漠草原），通过测定围栏封育与自由放牧样地与养分循环和牧草供给等功能密切相关的指标，利用平均值法和多阈值法探讨围栏封育工程对生态系统多功能性的影响。结果表明：高寒草地植物多样性、物种丰富度和生态系统多功能性都会随降水量减少而降低（P<0.05）。围栏封育显著提高植物多样性、物种丰富度以及地上生物量。进一步分析发现，生态系统多功能性与Margalef指数、Simpson指数和Shannon-Weiner指数、物种丰富度均呈显著正相关（P<0.05），而与Pielou指数不相关。多阈值法显示围栏封育和自由放牧样地物种丰富度对生态系统多功能性的有效驱动分别在1%～84%和5%～82%阈值区间内，最大效应值分别是0.69和0.70。综上，围栏封育会使植物多样性发生变化，进而影响生态系统多功能性，保护物种多样性对于维持生态系统多功能性具有重要意义。

关键词： 穿心莲内酯   手足口病   肠道病毒71型   柯萨奇病毒A16型   抗病毒作用  

摘要： 目的 观察穿心莲内酯体外抗肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A16型（CA16）的作用效果。方法 采用细胞病变CPE法和噻唑蓝（MTT法）测定穿心莲内酯对RD细胞的最大无毒剂量和穿心莲内酯对感染细胞后的EV71和CA16体外抑制作用；通过荧光定量PCR法检测穿心莲内酯溶液对EV71和CA16中VP1基因，RD细胞中IL-1β、IL-6和TNF-α3种促炎因子在基因水平的变化。结果 MTT结果显示穿心莲内酯对RD细胞的最大无毒剂量为78μg/mL；手足口病毒感染细胞，随后分别经78、39、19.5、9.75、4.88、2.44μg/mL的穿心莲内酯溶液处理，感染EV71病毒的细胞存活率增加至（82.41±1.76）%、（79.54±2.91）%、（81.02±1.99）%、（71.81±2.26）%、（52.87±1.51）%和（50.41±0.93）%，感染CA16病毒的细胞存活率增加至（81.00±0.64）%、（79.72±1.38）%、（61.59±3.47）%、（53.37±0.53）%、（52.41±1.37）%和（43.69±0.40）%，表明穿心莲内酯能明显降低EV71和CA16引起的细胞病变效应；手足口病毒感染后，用78、39、19.5、9.75μg/mL的穿心莲内酯溶液给药，显示EV71和CA16中VP1，RD细胞中促炎因子IL-1β、IL-6和TNF-α四个基因表达量与病毒对照组相比均有明显降低，结果表明手足口病毒感染后，用穿心莲内酯溶液给药，对手足口病毒的VP1基因表达产生明显抑制作用，且能降低IL?1β、TNF-α、IL?6在mRNA水平的表达。结论 穿心莲内酯具有明显地体外抗EV71和CA16病毒的效果，其可能通过抑制促炎因子IL?1β、TNF-α、IL?6的表达，从而发挥抗EV71和CA16病毒的作用。

关键词： 去氢二异丁香酚   TFEB   自噬   H1N1病毒  

摘要： 基于转录因子EB（transcription factor EB，TFEB）/自噬溶酶体生物发生探究去氢二异丁香酚（dehydrodiisoeugenol，DEH）抗病毒感染的细胞学机制。采用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8，CCK-8）检测去氢二异丁香酚对人非小细胞肺癌细胞系（A549）细胞活力的影响；实时荧光定量聚合酶链式反应（real-time quantitative polymerase chain reaction，RT-qPCR）检测其对甲型流感病毒（influenza A virus，H1N1）复制的影响；蛋白免疫印迹（Western blot）法检测去氢二异丁香酚对H1N1病毒核蛋白（nucleoprotein，NP）表达的影响；免疫荧光检测去氢二异丁香酚对H1N1病毒NP蛋白荧光强度的影响；构建H1N1病毒滴鼻感染小鼠模型，评价30 mg·kg-1去氢二异丁香酚对H1N1病毒感染的治疗作用；在胚胎成纤维细胞（mouse embryonic fibroblasts， MEFs）中通过转录组测序技术（RNA sequencing，RNA-seq）测序分析药物对分析药物的转录表型组；利用微管相关蛋白1轻链3（microtubule-associated protein 1 light chain 3，LC3）荧光质粒检测去氢二异丁香酚对细胞自噬的影响；Western blot检测病毒感染下DEH对LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白自噬流的影响；最后，在野生型及TFEB敲除的永生化骨髓源性巨噬细胞（iBMDM）细胞中评价TFEB表达缺失对去氢二异丁香酚抗H1N1病毒感染的影响。结果显示，去氢二异丁香酚对A549细胞的半数抑制浓度(half-maximal inhibitory concentrations，IC50)为（87.17 ± 0.247）μmol·L-1；体外以剂量依赖方式抑制H1N1病毒复制；与H1N1病毒滴鼻感染小鼠模相比，去氢二异丁香酚治疗显著了提升小鼠的体质量和生存时间；药物处理后引起LC3聚集；在iBMDM细胞中TFEB表达缺失显著限制了去氢二异丁香酚抵抗H1N1病毒复制的作用。综上所述，去氢二异丁香酚通过激活TFEB/自噬溶酶体途径抵抗H1N1病毒感染。