关键词:
益气利湿方
HIV/AIDS
CD4^(+)T细胞
免疫重建
网络药理学
分子对接
摘要:
目的:采用网络药理学和细胞实验探讨益气利湿方调控HIV NL4-3感染CD4^(+)T细胞凋亡的作用机制。方法:通过中药系统药理学数据库与分析平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSP)筛选益气利湿方的活性成分和靶点,采用GeneCards、OMIM数据库筛选HIV/AIDS的靶点,借助Venny 2.1.0获取两者的交集靶点。通过STRING数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)网络,根据节点度值筛选核心靶点。利用DAVID数据库进行基因本体(Gene Ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析。采用MOE软件对关键成分与核心靶点进行分子对接。将50只SD大鼠随机平均分为空白组、益气利湿方组(9.45 g·kg^(-1)),每天灌胃1次,连续7 d,制备空白血清和含药血清。建立HIV NL4-3假病毒侵染MT-4细胞模型,将细胞分为对照组、模型组、5%益气利湿方含药血清组(YQLS-L)、10%益气利湿方含药血清组(YQLS-M)及15%益气利湿方含药血清组(YQLS-H)。采用CCK-8法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,qPCR法和Western blot法检测细胞BCL2L1、MAPK1(ERK)、Caspase-3、Caspase-9基因和蛋白表达水平。结果:益气利湿方活性成分97种,作用靶点582个。HIV/AIDS靶点2017个,两者的交集靶点237个。益气利湿方治疗HIV/AIDS的关键成分包括槲皮素、木犀草素、β-谷甾醇、茯苓酸C等,核心靶点包括丝裂原活化蛋白激酶1(mitogen-activated protein kinase 1,MAPK1)、胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-9、BCL2L1等。分子对接显示,关键成分与核心靶点具有较好的结合活性。与对照组比较,模型组细胞早期凋亡率、晚期凋亡率及总凋亡率升高(P<0.01)。与模型组比较,YQLS-L组、YQLS-M组、YQLS-H组细胞存活率升高,晚期凋亡率和总凋亡率降低(P<0.01)。与对照组比较,模型组细胞BCL2L1 mRNA水平降低,Caspase-3 mRNA、MAPK1 mRNA水平升高(P<0.01)。与模型组比较,YQLS-L组、YQLS-M组、YQLS-H组细胞BCL2L1 mRNA水平升高,MAPK1 mRNA水平降低(P<0.01)。与模型组比较,YQLS-L组、YQLS-M组细胞Caspase-3 mRNA水平降低(P<0.01)。与模型组比较,YQLS-L组细胞Caspase-9 mRNA水平降低(P<0.05)。与对照组比较,模型组细胞BCL2L1蛋白表达水平降低,Cleaved-Caspase-3、p-MAPK1(p-ERK)蛋白表达水平升高(P<0.01)。与模型组比较,YQLS-L组、YQLS-M组、YQLS-H组细胞BCL2L1蛋白表达水平升高(P<0.05),Cleaved-Caspase-3、p-MAPK1(p-ERK)蛋白表达水平降低(P<0.01)。结论:益气利湿方可能通过调节PI3K/AKT信号通路,从而抑制CD4^(+)T细胞凋亡。