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关键词： 牦牛   牛病毒性腹泻病毒(BVDV)   流行病学   实时荧光定量PCR   遗传进化分析  

摘要： 【目的】了解青海省海北地区牦牛群中牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)的流行情况及遗传学分子特征。【方法】对采集自青海海北地区的148份腹泻牦牛粪便样品提取病毒RNA并反转录合成cDNA,以其为模板扩增BVDV 5′-UTR保守区域,建立特异性检测牦牛BVDV的实时荧光定量PCR方法,并以该方法对青海海北地区牦牛养殖场BVDV感染情况进行检测。选取4份BVDV阳性样品,对BVDV 5′-UTR区域序列进行PCR扩增和测序,与NCBI中不同亚型BVDV以及同属病毒毒株进行相似性比对,并基于BVDV 5′-UTR区域进行遗传进化分析。【结果】本研究基于BVDV 5′-UTR成功建立实时荧光定量PCR检测方法,标准曲线相关系数(R^(2))为0.997,标准品浓度为2.69×10^(2)~2.69×10^(9)拷贝/μL时具有良好的线性关系,最小检出限为2.69×10^(2)拷贝/μL。重复性试验结果显示,变异系数均<1.7%,具有良好的重复性和稳定性。采用建立的实时荧光定量PCR方法对青海省海北地区门源县、祁连县、海晏县和湟源县的腹泻牦牛粪便样品进行检测,结果显示,BVDV阳性率分别为45.00%、36.00%、30.77%和29.00%。BVDV 5′-UTR序列比对结果显示,分离获得的4株牦牛源BVDV与伊朗、美国的BVDV-1a亚型毒株聚集在同一个独立分支,核苷酸序列相似性为76.6%~99.7%。【结论】本研究明确了BVDV-1a型是导致青海省海北地区牦牛腹泻的重要病原之一,为该地区牦牛养殖场及时、有效地采取防控措施提供了科学依据,同时丰富了当地BVDV的分子流行病学调查数据,为该地区牛病毒性腹泻病的防控及疫苗研发提供了理论基础。

关键词： 姜黄素   单羰基姜黄素类似物   乳腺癌   羟醛缩合反应   生物信息学   分子对接   细胞凋亡  

摘要： 目的设计并合成单羰基姜黄素类似物,并考察其抗乳腺癌活性。方法通过羟醛缩合反应获得单羰基姜黄素类似物F1、F2和F3,采用MTT法检测其抗肿瘤(包括人乳腺癌细胞MCF-7和人肺癌细胞A549)活性[以半数抑制浓度(IC_(50))评估],并与姜黄素进行比较。根据生物信息学分析方法分别获取F1、F2和F3作用于乳腺癌的第一核心蛋白,并进行分子对接验证。采用细胞实验进一步考察高、中、低浓度(16、8、4μmol/L)的F1、F2和F3对MCF-7细胞中对应第一核心蛋白以及中浓度的F1、F2和F3对细胞中剪切型胱天蛋白酶3(cleaved-caspase-3)表达的影响。结果与姜黄素相比,F1、F2和F3对A549、MCF-7细胞的IC5(0 F2对A549细胞的IC_(50)除外)均显著降低(P<0.05或P<0.01),其中F2对MCF-7细胞的IC_(50)最小,为(9.67±1.27)μmol/L。生物信息学分析结果显示,F1、F2和F3与其对应第一核心蛋白表皮生长因子受体(EGFR)、蛋白激酶B(AKT)、AKT的亲和力指数分别为5.9092、8.4025和6.4866。高浓度的F1可显著降低MCF-7细胞中EGFR蛋白磷酸化水平(P<0.01),低、中、高浓度的F2和高浓度的F3均可显著降低MCF-7细胞中AKT蛋白磷酸化水平(P<0.05或P<0.01),中浓度的F1、F2、F3均可显著升高MCF-7细胞中cleaved-caspase-3蛋白表达水平(P<0.01)。结论设计合成的单羰基姜黄素类似物F1、F2、F3均具有良好的抗乳腺癌活性,其中F2的抗乳腺癌活性更好。

关键词： 腺病毒感染,人   肺炎,病毒性   继发感染   儿童  

摘要： 目的探讨儿童院内继发腺病毒呼吸道感染的临床特点。方法选取2018年12月—2024年2月河北省儿童医院收治的因呼吸道感染住院期间发生院内继发腺病毒呼吸道感染的患儿84例为研究对象,收集患儿的临床资料,包括性别、年龄、基础疾病、是否存在喘息症状、入院时病原体,检测腺病毒。根据院内继发腺病毒呼吸道感染是否发展为肺炎将患儿分为肺炎组和非肺炎组。记录患儿预后情况。结果84例院内继发腺病毒呼吸道感染患儿中,男47例(56.0%),女37例(44.0%);年龄1个月23天~13岁;21例(25.0%)存在基础疾病;43例(51.2%)存在喘息症状;入院时检出病原体112株。84例院内继发腺病毒呼吸道感染患儿发生肺炎61例(72.6%)。肺炎组年龄低于非肺炎组,合并基础疾病者占比、存在喘息症状者占比高于非肺炎组(P<0.05)。84例院内继发腺病毒呼吸道感染患儿中放弃治疗3例,发生闭塞性细支气管炎7例。结论院内继发腺病毒呼吸道感染患儿易并发肺炎,尤其对于年龄较小、合并基础疾病、存在喘息症状者。

关键词： 口腔癌   细胞凋亡   MTH1抑制剂   TH287  

摘要： 目的:探讨MTH1(MutT同源蛋白1)抑制剂TH287对口腔癌细胞CAL27增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响,并揭示其潜在的作用机制。方法:采用人口腔癌细胞CAL27细胞,通过CCK-8、克隆形成、划痕、Transwell实验评估TH287对增殖迁移的影响;Annexin V-FITC/PI及线粒体膜电位检测分析凋亡效应;Western blot检测凋亡蛋白及PI3K/AKT通路变化;SC79预处理验证TH287经PI3K/AKT通路调控凋亡。结果:TH287能够显著抑制CAL27细胞的增殖和迁移能力。CCK-8实验和克隆形成实验结果显示,随着TH287浓度的增加,CAL27细胞的增殖活力逐渐降低,集落形成数量显著减少。划痕试验和Transwell实验进一步佐证该抑制剂对细胞的抑制作用。Annexin V-FITC/PI双染实验显示TH287显著诱导CAL27细胞凋亡,表现为凋亡细胞比例的增加;线粒体膜电位检测发现在TH287处理下,CAL27细胞的线粒体膜电位明显降低。Western blot分析表明,TH287浓度与抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平、Bcl-2/Bax比值成反比,与促凋亡蛋白Bax的表达水平成正比。此外,TH287能够抑制PI3K/AKT信号通路的活化,降低AKT的磷酸化水平。进一步使用AKT磷酸化激活剂SC79进行预处理显示,细胞活力增加和凋亡率降低,说明PI3K/AKT信号通路可能与TH287调控CAL27细胞的凋亡有关。结论:MTH1抑制剂TH287对口腔癌细胞CAL27具有显著的抗肿瘤作用,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路、诱导细胞凋亡有关。

关键词： 盖塔病毒   感染性克隆   报告病毒  

摘要： 为了开发表达外源基因的重组盖塔病毒,通过反向遗传技术,在盖塔病毒nsP3基因的C端插入绿色荧光蛋白ZsGreen,并通过转染至BHK-21细胞拯救重组病毒并研究其生长特性。结果:感染性cDNA克隆pSM-GETV-nsP3/ZsGreen转染BHK-21细胞后表达绿色荧光蛋白,所拯救的报告病毒可以在BHK-21细胞上稳定传代(至少10代),并表现出良好的遗传稳定性;多步生长曲线试验表明,报告病毒GETV-ZsGreen在BHK-21细胞上的增殖能力略低于亲本毒株,但仍能达到较高病毒滴度。综上,本研究构建并拯救了1株遗传稳定的GETV报告病毒GETV-ZsGreen。

关键词： 慢病毒载体   溶质载体家族1成员5   SLC1A5   过表达   敲低   RAW264.7细胞   稳转细胞株  

摘要： 背景:溶质载体家族1成员5(solute carrier family 1 member 5,SLC1A5)在多种疾病中发挥了潜在作用,但确切作用机制尚不清楚。构建稳定的SLC1A5过表达和敲低细胞模型可为深入研究SLC1A5在疾病中的确切作用机制以及发现潜在治疗靶点提供有力的实验工具。目的:构建小鼠SLC1A5过表达和敲低的慢病毒载体,以建立稳定转染的RAW264.7细胞株,为深入探讨SLC1A5在炎症中的作用提供实验基础。方法:根据SLC1A5基因序列设计合成引物并使用聚合酶链反应扩增该基因片段。将目的基因定向接入经Age I/Nhe I酶切的载体质粒GV492中构建重组慢病毒质粒,对阳性克隆进一步筛选后测序比对结果;pHelper1.0质粒载体、pHelper2.0质粒载体、目的质粒载体与293T细胞共同培养并转染,获得慢病毒原液进行包装和滴度测定;在此基础上,通过体外培养RAW264.7细胞,确定嘌呤霉素工作质量浓度;不同滴度的慢病毒分别与RAW264.7细胞共同培养,根据荧光强度确定转染效率;用嘌呤霉素挑选出稳定转染细胞,实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白免疫印迹方法检测稳定转染细胞株的SLC1A5基因和蛋白表达水平。结果与结论:(1)测序序列与目的序列一致提示重组慢病毒载体构建成功;(2)过表达SLC1A5慢病毒的滴度为1×10~9 TU/mL,敲低SLC1A5慢病毒的滴度为3×10~9 TU/mL;(3)确定RAW264.7细胞嘌呤霉素工作质量浓度为3μg/mL;(4)过表达/敲低SLC1A5慢病毒转染RAW264.7细胞的最佳条件皆为HiTransG P转染增强液且感染复数值等于50;(5)过表达SLC1A5稳转细胞株中SLC1A5基因和蛋白的表达量明显上调,而敲低SLC1A5稳转细胞株中SLC1A5基因和蛋白的表达量显著下调。结果表明,成功构建了小鼠SLC1A5过表达和敲低的慢病毒载体并获得稳定转染的RAW264.7细胞株。

关键词： 科学技术进步   太阳能转换   太空基地   人工光合作用   核心环节   试验机   二氧化碳   开发利用  

摘要： 近期,借助天宫空间站梦天实验舱内的基础试验机柜,中国航天员顺利开展了地外人工光合作用技术试验,并在国际上首次成功实现了高效的二氧化碳转换和氧气再生技术。光合作用是地球碳循环和氧气生成的核心环节,而随着科学技术进步,人类对人工光合作用日益重视,通过将太阳能转换为化学能,有助于为人类开发利用地外资源、建造太空基地乃至开拓地外殖民地奠定基础。

关键词： 中国生态系统研究网络   珍稀濒危植物   物种组成   生物多样性  

摘要： 珍稀濒危植物在生态系统的稳定性、基因多样性等方面发挥重要作用,珍稀濒危植物保护是生物多样性保护工作的重要组成部分。中国生态系统研究网络(Chinese Ecosystem Research Network,CERN)涵盖丰富的植被类型,包括大量的珍稀濒危植物。保护和研究CERN珍稀濒危植物资源对国家经济发展、维护生态平衡、生物多样性保护具有重大意义。本研究基于CERN植物物种名录数据集,加工生成了CERN珍稀濒危维管植物名录数据集,包含分布在14个生态站的189种珍稀濒危植物。本数据集数据来源可靠、加工方法合理,因此具有一定的质量保证,可作为开展国家尺度植物多样性相关研究的基础数据,也可为生态站加强珍稀濒危植物保护、监测和利用等提供重要参考。

关键词： 呼吸衰竭   重症腺病毒肺炎   免疫炎症指标   危险因素   预测模型  

摘要： 目的探讨基于复合型免疫炎症指标的列线图模型对重症腺病毒肺炎患儿并发呼吸衰竭的预测价值。方法回顾性研究杭州市余杭区第三人民医院2021年1月至2024年10月的202例重症腺病毒肺炎患儿,记录患儿住院期间的各项临床指标,根据重症腺病毒肺炎后3 d内是否发生呼吸衰竭分为呼吸衰竭组(n=104)和非呼吸衰竭组(n=98),利用Logistic回归分析识别呼吸衰竭的关键风险因素并构建对应列线图预测模型。通过内部验证法(校准曲线和Bootstrap法)评估模型的准确性。进一步通过受试者工作特征(ROC)曲线分析模型的效能,最终以临床决策曲线分析(DCA)探讨模型的实际应用价值。结果本研究重症腺病毒肺炎患儿的呼吸衰竭发生率为51.5%,Logistic回归分析发现重症腺病毒肺炎患儿发生呼吸衰竭的独立危险因素包括合并低蛋白血症(OR=9.845,95%CI 1.904~50.903,P=0.006)、多器官功能障碍评分(MODS,OR=1.773,95%CI 1.113~2.825,P=0.016)、社区获得性肺炎评分(CURB-65,OR=1.884,95%CI 1.160~3.060,P=0.010)、急性生理与慢性健康状况评分Ⅱ(APACHEⅡ,OR=1.293,95%CI 1.118~1.496,P<0.001)、中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR,OR=1.868,95%CI 1.271~2.744,P=0.001)、系统免疫炎症指数(SII,OR=1.002,95%CI 1.001~1.003,P=0.001)。基于以上独立危险因素构建列线图预测模型,ROC曲线分析其预测呼吸衰竭发生的曲线下面积(AUC)为0.806,95%CI为0.745~0.874,提示该模型具有较好的预测效能。Hosmer-Lemeshow检验显示该模型具有较好的拟合度(P=0.089),DCA提示该模型具有较高的临床应用价值。结论呼吸衰竭在重症腺病毒肺炎患儿中的发生率较高,基于低蛋白血症、MODS评分、CURB-65评分、APACHEⅡ评分、NLR、SII构建的列线图模型在预测重症腺病毒肺炎患儿发生呼吸衰竭风险中具有一定临床应用价值,早期监测并对症干预上述因素可能有利于改善患儿预后。

关键词： 生态瓶   碳中和   生态系统   必修二   《生物与环境》   高中  

摘要： 针对环境问题,我国提出在2030年实现“碳达峰”、2060年实现“碳中和”的“双碳”目标,其中涉及的环保、碳中和理念等与高中生物选择性必修二《生物与环境》第3章第5节《生态系统的稳定性》的内容有一定关联。我们在从课本习得的理论基础上。