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关键词： 猪传染性胃肠炎病毒   S基因、 N基因   载体构建   免疫原性  

摘要： 【目的】构建猪传染性胃肠炎病毒（transmissible gastroenteritis virus, TGEV）S、N基因的DNA疫苗载体，并进行免疫原性试验，为猪传染性胃肠炎（transmissible gastroenteritis, TGE）的防控和DNA疫苗研究提供技术支撑和基础数据。【方法】扩增S基因的A位点、D位点和N基因，并将N基因（单独）、A位点和D位点（融合）克隆至pCDNA3.1-His-C构建重组疫苗载体，运用生物信息学软件预测分析S(A-D)蛋白、N蛋白二级结构组成、三级构像、亚细胞定位和优势B细胞抗原表位。将构建成功的重组载体分别转染至PK-15细胞进行间接免疫荧光试验，运用共聚焦检测重组蛋白的表达分布情况。将重组疫苗载体单独或联合免疫小鼠，运用间接ELISA检测IgG抗体水平。【结果】扩增出S基因的A位点、D位点和N基因，大小分别为498、606、1 149 bp。构建了A位点与D位点（融合）、 N基因（单独）的DNA疫苗重组载体p-S(A-D)-His和p-N-His。生物信息学软件预测分析发现TGEV感染宿主细胞时N蛋白主要定位于细胞核和线粒体，S(A-D)蛋白主要定位于细胞质和线粒体，S(A-D)蛋白具有7个优势B细胞抗原表位，N蛋白具有8个优势B细胞抗原表位。重组载体p-S(A-D)-His和p-N-His均在PK-15细胞内成功表达，且S(A-D)-His和N-His在PK-15细胞核和细胞质中均有分布。重组疫苗载体免疫小鼠后，免疫效果由高至低依次为p-N-His> p-S(A-D)-His+p-N-His> p-S(A-D)-His。【结论】本研究构建了TGEV的S、N基因的DNA疫苗载体，免疫小鼠后均产生了较强的特异性抗体，为TGEV的核酸疫苗的研制提供了基础材料和依据。

关键词： 决策树   信息化管理   系统吞吐量   响应时间  

摘要： 进行区域卫生信息化管理时对有时间顺序的数据处理效果较差，对此，提出基于决策树的区域卫生信息化管理系统设计。在硬件设计上，以原有的管理系统逻辑架构为基础，采用LMH3401芯片设计ADC驱动电路，以两路驱动四路的结构支持管理信息数据的传输和采集;在软件设计上，对采样数据进行预处理，利用决策树技术从采样数据中抽取部分数据，建立决策树规则并预测数据，用于支持信息化管理决策，实现区域卫生信息化的高效管理，完成系统整体设计。实验结果表明:基于决策树的管理系统吞吐量大，交互操作响应时间短，提高了系统可靠性。

关键词： 杆状病毒   核定位信号   核转运受体   核孔复合物   蛋白修饰  

摘要： 杆状病毒是一类具有双链、环状、超螺旋DNA结构的病毒，其转录、复制以及子代病毒的组装都发生在细胞核内，而由于细胞核膜这一天然屏障的存在，分子量大于40～60 kDa的大分子物质无法直接穿透核膜，因此，病毒进化出了不同的策略来实现病毒蛋白的跨核膜转运。本文综述了杆状病毒编码蛋白的核转运途径，主要有杆状病毒衍生出的依赖核定位信号（nuclear localization signal, NLS）的经典核转运途径和不依赖NLS的非经典核转运途径。此外，病毒还会通过蛋白修饰、改变宿主结构等方法调控入核途径，从而实现病毒蛋白的核转运。

关键词： 皱皮香猪   CUL2基因   胶原蛋白   皮肤褶皱   生物信息学分析  

摘要： 旨在解析CUL2基因的结构变异是否影响基因表达及其与香猪皱皮严重程度之间的联系。本研究取200头6月龄皱皮香猪和普通香猪的皮肤和血样，采用PCR方法检测基因组中CUL2-I3-sv300位点的多态性分布，利用UCSC等在线软件分析该结构变异包含的功能元件，预测CUL2基因与其它基因间的互作网络，并应用RT-qPCR和Western blot技术检测CUL2以及皮肤胶原蛋白生成相关基因的表达量变化。结果表明，猪群中结构变异CUL2-I3-sv300表现出丰富的多态性，普通香猪中检测到缺失突变基因型MM、杂合型WM和野生型WW，而皱皮香猪中未检测到WW基因型；且皱皮香猪的M等位基因频率显著增加（P<0.05）。生物信息学分析提示，结构变异CUL2-I3-sv300中含有一个短散在元件（short interspersed nuclear element， SINE）、3个内含子剪切抑制子（intronic splicing silencers， ISS）和4个RNA结合蛋白位点（RNA binding protein sites， RBPs）等功能元件；预测CUL2可直接调控HIF-1α，进一步调控VEGFA、MMP-1、MMP-9，最终影响皮肤胶原蛋白的生成。经皮肤样品检测，MM型皱皮CUL2的mRNA表达量明显高于其它基因型；且MM型皱皮CUL2的蛋白表达量高于MM型普通皮肤的相应值。同时，MM型皱皮的MMP-1、MMP-9表达量高于普通皮肤，HIF-1α、VEGFA 、COL1A1、COL3A1、COL6A3基因表达量却低于普通皮肤。推测缺失型结构变异因丢失了SINE等功能元件，可促进皱皮CUL2等的表达，抑制胶原蛋白生成，进而加重香猪体侧皮肤褶皱的严重程度。

关键词： 耐受值   大型底栖无脊椎动物   辽河流域   综合压力梯度  

摘要： 耐受值可以定量比较生物在已知环境压力下的相对生存和繁殖能力大小。由于其可以描述生物在环境压力下协同进化出来的相对丰富度的多少和共存位置关系，因此常被用于构建水生生物评价指标。早期耐受值计算仅考虑了水环境质量或以生物多样性划分环境压力等级，难以全面反映水生态系统综合环境压力。本研究使用主成分分析法，将物理栖息地、水质和土地利用等变量结合形成综合可量化的环境压力梯度。基于各分类单元随该压力梯度的响应方式，使用权重平均值法计算了辽河流域大型底栖无脊椎动物各级分类单元的环境压力耐受值。计算数据来自辽河流域436个监测样点，最终对108个最低分类单元（属级或种级）、64个科级分类单元、23个目级分类单元和10个纲级分类单元，共计205个分类单元的耐受值进行了计算。通过建立生物指数和压力梯度之间的线性回归模型来判断耐受值的准确性。结果显示，生物评价指标同环境压力梯度之间有极好的响应关系，同时评价指标的判别能力也要显著高于以往研究结果，表明本研究计算的环境压力耐受值准确性更高，可以在辽河流域或者北方相似河流的生物评价中推广使用。

关键词： 甲状旁腺腺瘤   鳞状细胞分化   滋养细胞分化   甲状旁腺癌  

摘要： 患者女性，57岁。体检发现甲状腺结节2月；3月前因“甲亢”行碘131治疗。甲状腺影像学检查提示甲状旁腺占位。术后标本镜检示分化极差的癌，癌细胞显著异型，可见大量多核瘤巨细胞；部分细胞胞质较透亮，见鳞状细胞分化及角化形成，周围淋巴结5/5癌转移；另见甲状旁腺腺瘤成分；肿瘤侵犯甲状腺及周围骨骼肌组织。免疫组化显示：肿瘤细胞CK、GATA-3、P40、P63阳性，α-inhibin、PLAP部分阳性；PTH腺瘤区阳性，癌区阴性；Tg、TTF-1、BrafV600E、Vimentin、PAX8阴性。病理诊断为甲状旁腺腺瘤恶变为甲状旁腺癌，部分为伴有鳞状细胞分化和滋养细胞分化的去分化癌。甲状旁腺癌罕见，伴有鳞状细胞分化及滋养细胞分化的去分化甲状旁腺癌未见报道。具有独特的临床特征、生物学行为、形态学、免疫表型及分子病理学特征。

关键词： 猪捷申病毒   VP1蛋白   原核表达   间接ELISA  

摘要： 旨在建立针对猪捷申病毒（porcine teschovirus，PTV）5型的间接ELISA检测方法，为其防控提供物质储备。PTV是猪的一种急性、烈性病原，以高发病率和高致死率为主要特征。其临床表现包括脑炎、肺炎、繁殖障碍、心肌炎及腹泻等多种症状。但该病原亚型众多，不同亚型间差异较大，缺乏高效、特异的血清学检测方法。本研究针对危害较大的PTV-5构建了pET-30a-VP1重组质粒，通过原核表达获得了VP1蛋白，以纯化的VP1为包被抗原，经条件优化成功建立了针对PTV-5的间接ELISA方法。该方法与常见猪源病毒标准阳性血清无交叉反应，最低检测稀释度为1∶3 200，批内与批间变异系数均低于10%，具有良好的特异性、敏感性和重复性。利用该方法对东北地区279份临床样本进行检测，其阳性率为67.74%，与报道的流行情况相符。本研究建立的间接ELISA检测方法综合评价良好，为PTV-5的临床检测提供技术支持。

关键词： 结核分枝杆菌(Mtb)   环核苷酸磷酸二酯酶B(CnpB)   重组腺病毒   免疫治疗  

摘要： 目的 结核分枝杆菌（Mtb）耐药菌株的流行加剧了结核病（TB）的全球负担，凸显了对新的TB治疗策略的需求。方法 表达环二腺苷酸（c-di-AMP）分解酶磷酸二酯酶B（CnpB）的重组腺病毒疫苗（rAd-CnpB）经黏膜免疫正常小鼠，或单独或联合药物免疫治疗Mtb呼吸道感染小鼠。ELISA检测小鼠血清及肺泡灌洗液（BALF）抗体水平，实时定量PCR检测小鼠肺细胞因子γ干扰素（IFN-γ）、白细胞介素10（IL-10）转录水平，流式细胞术检测肺、脾CD4+、CD8+T细胞亚群细胞比例，ELISA检测脾细胞抗原刺激后的细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-10、炎症因子IL-6、肿瘤坏死因子α（TNF-α）分泌水平，平板计数法计数Mtb感染小鼠肺、脾的荷菌数。结果rAd-CnpB滴鼻免疫可诱导小鼠血清高滴度的IgG，BALF中IgG和IgA产生，肺、脾T淋巴细胞亚群改变。rAd-CnpB单独或联合药物治疗Mtb感染小鼠可诱导血清IgG水平、BALF中IgA和IgG水平显著增高，rAd-CnpB免疫促进Mtb感染小鼠的脾细胞CnpB抗原特异性的细胞因子和炎症因子分泌。rAd-CnpB单独或联合药物免疫治疗并不显著影响Mtb呼吸道感染小鼠肺、脾荷菌数。结论rAd-CnpB经黏膜免疫可诱导小鼠显著的黏膜、体液免疫反应，并显著增强Mtb感染小鼠中CnpB特异性细胞免疫应答。

关键词： 蝴蝶兰   病毒   vsiRNAs   互作  

摘要： 【目的】探明蝴蝶兰和病毒（建兰花叶病毒、齿兰环斑病毒）之间的相互作用，进而为制定蝴蝶兰病毒性病害的有效防控措施提供理论基础。【方法】首先通过RT-PCR特异扩增建兰花叶病毒（cymbidium mosaic virus,CymMV）和齿兰环斑病毒（odontoglossum ringspot virus, ORSV）外壳蛋白基因片段，通过电镜负染和切片技术明确CymMV和ORSV在蝴蝶兰细胞中的存在；然后通过小RNA深度测序技术鉴定分析病毒来源的小干扰RNA(vsiRNAs)的丰度、长度、碱基偏好性和正负义来源等特征。【结果】RT-PCR能够特异地扩增到外壳蛋白基因片段，电镜负染和超薄切片结果中都能够观察到长约300 nm棒状的CymMV病毒粒子和长约500 nm线性的ORSV病毒粒子的存在；小RNA深度测序分别获得7 563 892和6 133 689个读数的CymMV和ORSV来源的vsiRNAs,vsiRNAs在丰度、长度、碱基偏好性和正负义来源等方面具有一定的普遍性和特异性等特征。【结论】CymMV和ORSV两种病毒在蝴蝶兰植株中的存在复合侵染；CymMV和ORSV viRNAs的丰度、长度、悬挂、碱基偏好性、正负义链分布、 Hotspot和Coldspot等特征具有普遍性和特异性，病毒复合侵染鉴定及其病毒来源vsiRNAs特征的分析加深了病毒与蝴蝶兰之间互作的理解，对于开发蝴蝶兰病毒性病害的防治措施具有重要的理论意义。

关键词： 根芹   蚕豆萎蔫病毒2号   序列一致性   系统发育分析  

摘要： [目的]获取蚕豆萎蔫病毒2(broad bean wilt virus 2,BBWV 2)内蒙古根芹（Apium graveolens var. rapaceum）分离物全基因组序列，并将该基因组序列与其他BBWV 2分离物基因组序列进行一致性、系统发育及重组等分析。[方法]以疑似感染病毒的根芹叶片样品为实验材料，通过NGS技术确定样品中感染病毒的种类，通过RT-PCR技术结合cDNA末端快速扩增技术（Rapid amplification of cDNA ends,RACE）验证病毒种类，通过VectorNTI、MEGA11、SDTV1.2以及RDP4等软件对克隆到的BBWV 2内蒙古根芹分离物20IM-ApGr进行全基因组序列分析。[结果]成功克隆了BBWV 2内蒙古根芹分离物20IM-ApGr两条RNA的完整序列；序列一致性分析结果显示，20IM-ApGr与其他分离物在Pro-RdRp区域和CPs区域的氨基酸序列一致率分别为85.2%～99.5%和82.8%～92.7%；基于BBWV 2基因组的Pro-RdRp区域和CPs区域所构建的系统发育树均可以将目前已知的BBWV 2分离物分为2个分支，其中本研究所获得的分离物均处于第II分支，并分别与中国辣椒分离物Hunan、XJ14-3亲缘关系最近。[结论]明确了造成根芹叶脉黄化以及叶片皱缩的病毒性病原为BBWV2，首次获得BBWV 2内蒙古根芹分离物的全基因组序列，并阐述了其与已知的BBWV 2分离物之间的进化关系，可为BBWV 2株系划分、遗传进化研究奠定理论基础。