关键词:
植物雌激素
大豆黄酮
小鼠乳腺上皮细胞
乳成分合成
乳腺上皮细胞的增殖
摘要:
本试验旨在研究植物雌激素大豆黄酮(daidzein, DZ)对小鼠乳腺上皮细胞EpH4-Ev乳糖、乳蛋白、乳脂肪合成及细胞增殖的影响,探讨相关的调节作用。首先用不同浓度DZ(0~1000 μmol·L-1)处理EpH4-Ev细胞6、12、24、48 h,通过检测细胞活力确定DZ作用浓度及时间;确定试验分为对照组(0 μmol·L-1DZ处理)、低浓度组(10 μmol·L-1DZ处理)、中浓度组(20μmol·L-1DZ处理)、高浓度组(40 μmol·L-1DZ处理),并以生理剂量的雌二醇(E2)作为阳性对照,37℃、5%CO2培养12 h后,进行如下试验:1)测定细胞及分泌上清中甘油三酯(TG)、葡萄糖(GLU)含量及脂滴染色变化;2)检测细胞增殖与凋亡相关蛋白、乳成分合成相关蛋白的表达变化;3)检测PI3K/AKT-mTOR信号通路关键蛋白的磷酸化水平表达;4)流式细胞技术分析细胞凋亡率与细胞周期分布情况。结果显示:1)与对照组相比,2.5~80 μmol·L-1DZ处理后,细胞活力极显著提高(P<0.01),其中20 μmol·L-1DZ处理提高效果最为显著,结合实验室前期结果,选择DZ作用的低、中和高浓度分别为10、20和40 μmol·L-1,作用时间为12 h。2)与对照组相比,中浓度及高浓度组DZ及E2处理后极显著提高了EpH4-Ev及细胞及分泌上清中TG和GLU的含量及促进了脂滴的合成(P<0.01)。3)与对照组相比,不同浓度DZ处理后葡萄糖转运载体1(GLUT1)和β-酪蛋白(β-casein)的表达均极显著升高(P<0.01);同时DZ及E2处理后均提高脂肪酸合成酶(FAS)、胆固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)的表达。4)与对照组相比,不同浓度DZ及E2处理后均增加了G2/M期和S期的细胞占比,上调了增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1、D3、抗凋亡蛋白Bcl-2的表达量,同时中浓度DZ组极显著增加了Bcl-2/Bax比值(P<0.01),细胞凋亡率降低。5)三个浓度DZ及E2处理后均上调了PI3K/AKT-mTOR信号通路中p-PI3K、p-mTOR、p-AKT的磷酸化水平。结果表明:DZ处理可促进乳腺上皮细胞的增殖及乳成分的合成。其机制与上调细胞增殖蛋白的表达、降低细胞凋亡率,激活PI3K/AKT-mTOR通路有关。