关键词:
热补针法
类风湿关节炎
TRAF6泛素化
炎性反应
核因子-κB通路
摘要:
目的:观察热补针法对类风湿关节炎(RA)寒证家兔模型膝关节滑膜组织中肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)-K63泛素化水平及核因子-κB(NF-κB)通路的影响,探讨热补针法抑制RA滑膜炎性反应的机制。方法:32只家兔中随机抽取8只为正常组。剩余家兔采用卵蛋白联合弗氏完全佐剂诱导及低温冷冻法建立RA寒证模型,评估后随机分为模型组、抑制剂组、热补针法组,每组各6只。抑制剂组给予C25-140溶液(2.5 mg/kg)腹腔注射,2次/d,共14 d;热补针法组采用热补针法的操作标准针刺“足三里”,留针30 min,1次/d,共14 d。干预完成后观察家兔一般情况,测量膝关节周径值和痛阈值,彩色多普勒超声观察膝关节影像学变化,HE染色后观察膝关节滑膜组织形态学变化,采用免疫组织化学法观察滑膜组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6炎性因子的表达,采用Western blot法检测滑膜组织中泛素结合酶E2 13(Ubc13)、NF-κB p65的蛋白表达,采用免疫共沉淀法检测滑膜组织中TRAF6-K63泛素化水平。结果:与正常组比较,模型组痛阈值降低(P<0.05),膝关节周径增加(P<0.05),滑膜病理积分,滑膜组织中TNF-α、IL-1β、IL-6的平均吸光度,NF-κB p65、TRAF6蛋白表达及其K63泛素化水平升高(P<0.05),Ubc13蛋白表达降低(P<0.05);与模型组比较,热补针法组及抑制剂组的痛阈升高、膝关节周径减小(P<0.05),滑膜病理积分降低(P<0.05),滑膜组织中TNF-α、IL-1β、IL-6的平均吸光度,NF-κB p65、TRAF6蛋白表达及其K63泛素化水平明显降低(P<0.05),Ubc13蛋白表达升高(P<0.05);与热补针法组比较,抑制剂组家兔痛阈,膝关节滑膜组织TNF-α、IL-1β、IL-6的平均吸光度值,NF-κB p65蛋白表达,TRAF6蛋白及其K63泛素化水平降低(P<0.05),Ubc13蛋白表达升高(P<0.05)。结论:热补针法可通过抑制TRAF6-K63泛素化水平,下调NF-κB通路活性,减少下游炎性因子的分泌,从而起到抑制滑膜炎性反应的作用。