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关键词： SARS-CoV-2   S基因   变异特征   替换速率   选择压力  

摘要： 目的 分析新冠病毒感染和疫苗接种在病毒变异中的影响。 方法 选取了江苏省2023年2 659份本土新型冠状病毒标本的全基因组测序序列进行了分析，并收集人口学和临床特征等相关信息，利用单因素和多因素线性回归模型分析探讨感染及疫苗接种对病毒全基因组变异速率和S基因选择压力的影响。 结果 这些感染者的平均年龄为55.0(31.0, 74.0)岁，60岁及以上年龄组1 150例(43.2%)，男性1 367例(51.4%)，有新冠疫苗接种史者2 044例(76.9%)，初次感染新冠者1 629例(61.3%)；感染者临床症状以轻型为主，共2 434例(91.5%)，重型及以上症状者29例(1.1%)。SARS-CoV-2全基因组的平均替换速率为9.69(9.38, 9.98)×10 －4 subs/site/year，S基因的dN/dS值为6.08(5.56, 8.66)，显著大于1( P <0.001)，表明受到了正选择作用。单因素和多因素线性回归模型分析结果显示，具有疫苗接种史且再次感染、年龄20~30岁、60岁及以上者的SARS-CoV-2替换速率更高，男性、临床症状为中型、重型及以上者的SARS-CoV-2替换速率更低；具有疫苗接种史且再次感染、50~60岁、60岁及以上者的S基因dN/dS更小。 结论 在新冠疫苗接种及感染施加的免疫压力下，新冠病毒全基因组变异加快，但S基因的非同义突变率减弱，引起这些现象的机制需进一步深入研究。

关键词： 流感病毒H3N2   LiCl   A549细胞  

摘要： 目标 分析氯化锂(Lithium chloride，LiCl)在人非小细胞肺癌细胞(A549)抗甲型H3N2流感病毒(Influenza A virus (H3N2))活性研究。 方法 不同浓度LiCl作用于A549细胞，24 h后观察细胞病变(cytopathic effect，CPE)，CCK-8方法测定其对细胞活性的影响；H3N2 (MOI＝1)感染A549细胞后，加入不同浓度的LiCl作用24 h，观察CPE、RT-qPCR方法测定病毒载量，测定病毒滴度；不同浓度LiCl提前和A549在37 ℃，5%CO 2 孵育2 h，加入病毒感染24 h，RT-qPCR方法测定病毒载量；LiCl、H3N2和A549 4 ℃孵育1 h，35 ℃，5%CO 2 培养24 h，RT-qPCR方法测定病毒载量；H3N2和A549 4 ℃孵育1 h，然后加入不同浓度LiCl，35 ℃，5%CO 2 培养24 h，RT-qPCR方法测定病毒载量；H3N2感染A549细胞后，加入不同浓度的LiCl作用24 h，分别检测上清和细胞的病毒RNA载量和病毒滴度，然后计算上清和细胞相应的比值H3N2(MOI＝10)和BV(MOI＝1)感染A549细胞后，加入不同浓度的LiCl作用24 h, RT-qPCR方法测定病毒载量。 结果 LiCl浓度<50 mmol/L时，A549的细胞活性>90%；不同浓度的LiCl均可显著降低H3N2病毒载量( P <0.000 1)，LiCl处理组的CPE较病毒对照组有所缓解，并且呈剂量依赖性；LiCl不通过影响细胞本身抑制病毒复制；不同浓度LiCl显著抑制H3N2进入A549( P <0.000 1)也对吸附A549细胞有一定程度的抑制作用( P <0.01)；LiCl不影响H3N2的组装和释放( P >0.05)；最后也发现LiCl对多种流感病毒毒株有广谱的抗病毒效果( P <0.000 1)。 结论 LiCl可能通过抑制H3N2吸附和进入A549细胞以及H3N2在A549细胞中复制来发挥抗病毒作用，为LiCl防治病毒感染提供了数据参考。

关键词： 间充质干细胞   干细胞疗法   炎症性肠病   溃疡性结肠炎   克罗恩病   机制   工程化干细胞  

摘要： 背景：炎症性肠病发病率逐渐升高，且暂无良好的治疗方案，研究表明与传统治疗方法相比，间充质干细胞治疗炎症性肠病展现出较佳的疗效。目的：综述不同来源间充质干细胞治疗炎症性肠病的作用机制，为后续研究提供思路。方法：以“间充质干细胞，外泌体，炎症性肠病，溃疡性结肠炎，克罗恩病”和“mesenchymal stem cells,MSCs,exosomes,extracellular vesicles,EVs,inflammatory bowel disease,IBD,ulcerativecolitis,UC,Crohn’s disease,CD”分别作为中、英文关键词，在中国知网、PubMed数据库进行检索，最终纳入符合标准的89篇文献进行综述。结果与结论：目前用于治疗炎症性肠病的间充质干细胞共有6类，分别为骨髓间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、围产期组织来源间充质干细胞、诱导多能干细胞衍生的间充质干细胞、胚胎干细胞衍生的间充质干细胞、牙龈间充质干细胞。移植方式共有5种，静脉注射和腹腔注射为最常用方式，此外还有局部注射、肠系膜注射、灌肠3种方式。上述间充质干细胞减轻炎症性肠病症状或延缓其进展的主要机制包括分化、再生、抗炎、免疫调节、神经保护、抗氧化应激、归巢、调节肠道菌群、自噬、铁死亡、内质网应激等。不同来源间充质干细胞在功能上有一定相似性，但又具有不同特点，这些特点使它们具有独特优势和治疗潜力。然而，目前对不同来源间充质干细胞特性的研究仍然有限，需要对不同来源间充质干细胞之间的细微差别进行更深入研究，以优化其治疗炎症性肠病的潜力，同时，临床使用安全性也有待进一步观察。

关键词： H9N2   禽流感   系统进化   分子特征  

摘要： 目的 分析2013—2022年安徽省人感染的H9N2亚型禽流感病毒与外环境毒株的遗传进化特点及分子特征，为人感染禽流感防控提供了监测经验。 方法 选取安徽省流感监测网络实验室中的外环境样本和人源样本，通过鸡胚分离得到63株病毒，采用RT-PCR法扩增后进行全基因组测序，对其生物信息进行分析，构建基因进化树并分析其遗传进化特征以及潜在糖基化位点。 结果 血凝素(HA)基因属于9.***.4.5支系，蛋白裂解位点绝大部分为"PSRSSR\GL"，神经氨酸酶(NA)、碱性蛋白1(PB1)、酸性蛋白(PA)、非结构蛋白(NS)和核蛋白(NP)基因属于F/98支系，基质蛋白(MP)基因属于G1/97支系，碱性蛋白2(PB2)基因属于ST/7488支系。HA蛋白发生了T155N、R164Q、H183N、T189D/V、A190V/T和Q226L突变，NA蛋白发生了62~64位点缺失，PB2蛋白发生了T271A、I292V/M和E627V/L突变，PA蛋白发生了K356R和S409N突变。63株分离株存在6个潜在糖基化位点。 结论 2013—2022年安徽省外环境和人源采集的H9N2亚型禽流感病毒属于同一进化分支，氨基酸位点突变提示了病毒呈现出一种逐渐适应哺乳动物宿主环境的趋势，因而需进一步研究病毒的适应性进化情况以及开展相关的监测工作。

关键词： 生态系统服务   生境破碎化   广义可加模型   地理探测器   湖北省  

摘要： [目的]以湖北省为研究区域,探讨生态系统服务和生境破碎化之间的关系。[方法]利用2005和2020年的土地利用数据,计算生境面积比(M)、生境间欧氏最近邻距离的平均值(N)和生境边缘长度(P)等指标,采用InVEST模型评估水源涵养、土壤保持、碳储存和生境质量4种生态系统服务的价值,并通过广义可加模型和地理探测器,分析不同生境破碎化过程对生态系统服务变化的影响及其交互作用。[结果]2005—2020年湖北省生境破碎化程度加剧,各生境类型的M减少、N增加、P增多;湖北省生态系统服务价值呈现先降低后升高的趋势,其中水源涵养和土壤保持主要受气候因素影响,碳储存和生境质量主要受生境破碎化影响;湖北省生境破碎化过程对生态系统服务的影响存在线性或非线性关系,且不同过程之间存在正向的非线性增强作用。[结论]该研究为湖北省生态系统服务的保护和管理提供了科学依据和参考建议。

关键词： H1N1pdm   聚合酶碱性蛋白2   突变  

摘要： 目的 了解广东省甲型H1N1pdm流感病毒聚合酶碱性蛋白2(polymerase basic protein 2，PB2)基因变异株的分子特征，探讨其特异性分子位点，为流感病毒防控提供科学依据。 方法 采集感染PB2基因变异株的2例病例咽拭子标本进行病毒分离，并挑选23株广东省流感病毒株进行测序分析，利用GISAID提供的参考序列和疫苗株序列对血凝素(hemagglutinin，HA)和PB2基因进行进化分析；开展毒株抗原分析和神经氨酸酶(neuraminidase，NA)抑制试验；构建PB2蛋白模型，分析聚合酶活性。 结果 PB2-D701N和PB2-A271S变异株HA基因出现H399N氨基酸位点突变，均属于6B.1A.5a.2a分支；与疫苗株A/Victoria/4897/2022同属大分支不同小分支，均为疫苗类似株。在三维结构中，PB2-D701N和PB2-A271S突变发生电荷改变和亲疏水变化。 结论 PB2-D701和A271高度保守，PB2突变株尚未成为优势株，但其抗原性与疫苗匹配性高，对NA抑制剂敏感。三维模型推测，PB2-D701N突变可增强病毒的致病力而影响传播能力，PB2-A271S则可能影响流感病毒的聚合酶活性和聚合酶复合物的合成。

关键词： 中华穿山甲   种群   分布   数量   勐仑  

摘要： 采用访问调查法、样线调查法和红外相机陷阱拍摄法在西双版纳国家级自然保护区勐仑子保护区对中华穿山甲种群进行调查。结果显示,红外相机捕获的中华穿山甲影像计4个位点,样线调查发现中华穿山甲活动痕迹6处,访问调查法发现中华穿山甲疑似分布位点16个,提取这26个分布位点的高程、植被及生境信息,用ArcMap软件模拟生成勐仑子保护区中华穿山甲潜在分布区,面积约715 hm2,中华穿山甲种群密度为0.006只/hm2,中华穿山甲在调查区域的数量为（4±2）只。建议保护中华穿山甲生境,加强执法宣传力度,防止非法猎杀中华穿山甲,严肃查处中华穿山甲地下交易。

关键词： 肠道结构   盐碱胁迫   基因表达   青海湖裸鲤  

摘要： 为探究盐碱胁迫对青海湖裸鲤(Gymnocypris przewalskii)肠道的影响，将体重为(8.13±1.45)g的青海湖裸鲤一龄鱼驯养在水温为(15.3±1.6)℃的不同胁迫环境中养殖28 d，不同胁迫有盐胁迫组(Y100)、碱胁迫组(J100)和盐碱混合胁迫组(YJ100)，以3‰盐度为对照组(CK)。结果显示：J100组水环境的pH值最高，CK组最低。Y100组水环境的氨氮含量最高，YJ100组最低。Y100组青海湖裸鲤的肠道结构较其他组更加完全，浆膜层完整，纹状缘发达；J100组和YJ100组裸鲤前肠结构受到损伤，肌层厚度从前肠到后肠逐渐变薄；肠道的皱褶高度方面，CK组与Y100组前肠最高，中肠次之，后肠最低，YJ100组则反之；J100组中肠皱褶高度最高，后肠次之，前肠最低。不同胁迫组渗透相关基因GpAQP1、GpMAPK14、GpPLA2、GpCA2均在中肠表达量较高，而GpNKA1、GpALP则在前肠表达量较高。总之，碱处理和盐碱处理损伤了青海湖裸鲤肠道结构，从而影响了鱼体的生长发育，这一结论为解释自然状态下青海湖裸鲤生长缓慢提供研究方向。

关键词： 纤维连接蛋白   神经干细胞   少突胶质前体细胞   少突胶质细胞   细胞增殖   细胞分化   工程化干细胞   工程化细胞  

摘要： 背景：少突胶质前体细胞是治疗脑白质损伤性疾病的种子细胞，建立高效稳定扩增的体外诱导分化方法是实现临床转化研究的重要前提。目的：探讨纤维连接蛋白对人神经干细胞来源少突胶质前体细胞增殖、迁移和分化等生物学特性的影响。方法：将悬浮培养的人神经干细胞用Accutase消化成单细胞，通过流式细胞术检测特异性标志物Nestin、Sox2、Vimentin、CD133、Musashi的表达。然后将人神经干细胞单细胞重悬于少突胶质前体细胞培养基，接种于不同质量浓度纤维连接蛋白(0,1,2.5,5,10μg/mL)包被的6孔板中，培养7 d后Accutase消化进行传代，锥虫蓝染色计数细胞，选择扩增能力最强的纤维连接蛋白包被与未用纤维连接蛋白包被的少突胶质前体细胞进行下一步实验，Transwell小室检测细胞迁移能力，流式细胞术检测Olig2、Sox10、PDGFR-α的表达。将少突胶质前体细胞向少突胶质细胞诱导分化3周，免疫荧光染色检测分化细胞Galc的表达。结果与结论：(1)人神经干细胞呈悬浮球状生长，流式细胞术检测结果显示，人神经干细胞高表达Nestin、Sox2、Vimentin、CD133和Musashi；(2)由人神经干细胞诱导的少突胶质前体细胞的胞体为圆形或椭圆形，折光性强，有双极或三级突起结构；与0μg/mL纤维连接蛋白包被组比较，2.5,5,10μg/mL纤维连接蛋白包被组少突胶质前体细胞的扩增能力显著增强(P <0.05)；当纤维连接蛋白质量浓度为10μg/mL时，少突胶质前体细胞扩增能力最强；(3)流式细胞术检测结果显示0,10μg/mL纤维连接蛋白包被组均高表达少突胶质前体细胞标志物Olig2、Sox10和PDGFR-α，两组无统计学差异(P> 0.05)；(4)Transwell小室检测结果显示，与0μg/mL纤维连接蛋白包被组比较，10μg/mL纤维连接蛋白包被组少突胶质前体细胞的迁移能力增加(P <0.01)；(5)少突胶质前体细胞向少突胶质细胞分化3周，细胞呈多分支、网格状或膜片样复杂形态，免疫荧光染色结果显示两组少突胶质细胞Galc阳性率无统计学差异(P> 0.05)。结果表明，纤维连接蛋白质量浓度为10μg/mL时对少突胶质前体细胞的增殖和迁移作用最强，但不影响少突胶质前体细胞特异性标志物Olig2、Sox10和PDGFR-α的表达及其向少突胶质细胞的分化。

关键词： 乌蒙乌骨鸡   TYR基因   启动子区   转录因子   调控元件  

摘要： 本研究旨在克隆乌蒙乌骨鸡酪氨酸酶（TYR）基因启动子区序列并解析其分子结构特征，为探究该基因调控乌蒙乌骨鸡乌质性状的分子机制提供参考。以乌蒙乌骨鸡血液基因组DNA为模板，设计3对特异性引物，通过PCR扩增、Sanger测序及序列拼接方法获得TYR基因启动子区序列；采用DNAStar Lasergene和MEGA 5.0软件分别进行15个物种TYR基因启动子区序列相似性分析及系统进化树构建；利用生物信息学软件预测分析该序列核心启动子、调控元件、转录因子和CpG岛等分子结构特征。结果显示，乌蒙乌骨鸡TYR基因启动子区序列长3 216 bp（Genbank登录号：ON49713457），包括5'侧翼区2 858 bp和358 bp部分外显子1。乌蒙乌骨鸡与其他14个物种TYR基因相似性为40.9%～99.9%，乌蒙乌骨鸡与原鸡、鹌鹑等鸡形目亲缘关系较近，与猪亲缘关系较远。-600～-59 bp可能为乌蒙乌骨鸡TYR基因候选核心启动子区域，5'侧翼区-523 bp处可能存在1个转录起始位点C，存在1个CAAT-box、3个TATA-box、16个E-box、2个进化保守区域CR1和CR2、5个5'侧翼区近端黑色素细胞特异性元件（p-MSE），不存在CpG岛。乌蒙乌骨鸡TYR基因启动子区存在潜在的C/EBP-α、GATA-1、Sp1、Pdx1、TBP和NF-1等转录因子。本研究成功克隆获得乌蒙乌骨鸡TYR基因启动子区序列，为解析该基因调控乌蒙乌骨鸡乌质性状的分子机制提供了理论依据。